刺五加注射液对豚鼠庆大霉素耳毒性拮抗作用的实验的研究

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1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者张!逝边日期：．幽。竺1中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：

2、研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：!垄盈砒指导教师签名：．丝幺z刺五加注射液对豚鼠庆大霉素耳毒性拮抗作用的实验研究前言氨基甙类抗生素(aminoglycosideantibiotics，A

3、mAn)具有抗菌谱广、价格便宜及使用方便等优点，成为广泛使用的抗生素品种之一。尽管AmAn具有许多适于临床应用的特点，但是其不良反应也不容忽视，其中最严重的副作用是肾毒性和耳毒性。AmAn药物耳毒性发病率高，而且一旦发生慢性损伤，则大多数为不可逆，严重者甚至可引起失听，这些都严重影响了患者的生活质量。为此，了解氨基甙类抗生素耳毒性发病机制，为防治其不良反应提供理论依据势在必行。氨基甙类抗生素耳毒性的机制可能与氨基甙类抗生素在内耳的积蓄作用；自由基损伤；细胞凋亡；第二信使作用；mtDNA基因突变及体内某些金属离子有关

4、等。剌五加注射液(acanthopanaxsenticosus，ASS)系刺五加的茎时用常规方法制成的灭菌溶液，是临床上常用的活血化淤药。通过大量的研究和实验，人们对剌五加的活性物质及其药理作用做了深入研究，表明剌五加可增强机体非特异性防御能力，除具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射及抗疲劳等作用外，ASS还可扩张血管、增加冠状动脉回流量、减少心肌耗氧量、改善血液循环、消除自由基对组织的损害等广泛的药理作用，常用于治疗心脑血管疾病、糖尿病、神经衰弱等症。但用该注射液治疗氨基甙类抗生素所致耳毒性损伤的研究国内外却未见

5、报道。根据ASS的上述药理作用，我们推测ASS可扩张耳蜗血管，增加耳蜗血流量，改善内耳微循环，清除自由基，增强耳蜗对缺血缺氧的耐受能力等。本研究主要目的就是观察ASS是否对庆大霉素所致豚鼠耳毒性具有拮抗作用并探讨其机制，为临床应用其治疗AmAn耳毒性提供理论依据。实验方法一、实验动物分组及耳毒性模型制备·1·选用耳廓反应灵敏的健康白色红目豚鼠，体重约为200—2509，雌雄不拘。将豚鼠随机分成将豚鼠随机分成对照组、庆大霉素(gentamicin，GM)组、ASS+GM组和ASS组。GM组每日腹腔注射GM注射液100

6、mg／kg；ASS+GM组每日腹腔注射刺五加注射液200mg／kg，同时腹腔注射与GM组等量的GM注射液；ASS组每日腹腔注射与ASS+GM组等量的ASS；对照组每日腹腔注射生理盐水2．5ral／kg。各组动物皆连续用药10d混合饲养，每日测量体重调整药量。、二、ABR阈值检测在用药前和停药后处死前，将各组动物用1％戊巴比妥钠(40mg／kg)腹腔麻醉。用主频率为2kHz的短声刺激信号，耳机距豚鼠外耳道约0．5era左右，记录电极置颅顶正中，参考电极及接地电极分别置于给声耳及对侧耳后乳突都皮下，以DAT一100行叠

7、加仪进行叠加200次，以VC—lO示波器输出信号，观察时程为20ms，测试强度由95dBnHL开始，听阈判断以P3波为主。三、耳蜗标本的制备及检测技术1．SABC免疫组化及原位末端标记法(Tunel)：将各组动物快速断头处死取听泡，充分暴露耳蜗。在解剖显微镜下开放卵圆窗和圆窗，用微量注射器缓慢注入含4％多聚甲醛的0．1moL／L的磷酸缓冲液(PBS)，再将标本置于上述固定液中4℃下固定2小时。PBS冲洗后，放入10％EDTA中4。C下脱钙10d．再移入含25％蔗糖的PBS中4cc过夜。常规石蜡包埋，平行于蜗轴方向连

8、续切片，进行常规HE染色，免疫组化法测定耳蜗组织中诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、谷氨酸(glutamate，Glu)的表达，Tunel法检测耳蜗细胞的凋亡情况。2．电镜标本制备：豚鼠断头处死，速取听泡，充分暴露耳蜗，将耳蜗迅速浸入2．5％戊二醛固定液中。在解剖显微镜下开放卵圆窗和圆窗，在蜗尖钻孔缓慢注入2．5％戊二醛固定液，将标本置于固定液中40C4h后，