外源性神经生长因子(ngf)对庆大霉素耳毒性阈移影响的实验的研究

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1、中文摘要外源性神经生长因子(NGF)对庆大霉素耳毒性阈移影响的实验研究摘要目的：无论临床观察或实验研究均证明许多药物和化学试剂具有耳毒性，可引起耳蜗和前庭中毒性损害，造成耳聋及前庭功能障碍。氨基糖甙类抗生素(arninoglycosideantibiotics，AmAn)损伤毛细胞的机制尚不清楚，但有以下几种学说：(1)影响了磷酸肌醇、三磷酸肌醇、二脂酰甘油问转化从而导致细胞内钙离子浓度的变化；(2)抑制G蛋白和鸟氨酸脱羧酶活性；(3)氨基糖甙类抗生素能引起内耳毛细胞的凋亡。在过去近半世纪里，国内外学者对氨基糖甙类抗生索的耳毒性机制及其防治进行了大量的研究工作，虽然取得

2、了一定成绩，但并不尽人意。神经营养因子(neurotrophicfactors，NTFs)是一类能支持神经元生存和诱导神经突起生长的化学物质，在神经元的发育、轴突的生长、递质的合成以及细胞的凋亡等阶段均起着重要作用。细胞的存活、迁移、生长、分化、与其他细胞建立功能性联系、甚至损伤后神经元的存活及再生等均受这类物质影响，神经营养因子的失常或不足，可能是导致某些神经疾患或神经再生障碍的原因。神经营养N寻：(NTFs)X具有促进听觉神经系统发育并维持其正常功能的作用，其作用贯穿于从听板形成直至Corti器毛细胞与传入、传出神经末梢纤维之间建立突触关系的全过程。而神经生长因子(

3、nervegrowthfactor,NGF)是神经营养因子家族中最具代表性的一员，故研究神经生长因子对庆大霉中文摘要素耳毒性阈移的影响，有助于探讨其作用机制，并为临床治疗庆大霉素引起的听力损失提供理论依据。方法：采用昕脑干反应及耳蜗螺旋器毛细胞扫描电镜观察来分析NGF对庆大霉素耳毒性闽移的影响，具体步骤如下：(1)实验动物及处理。选择耳廓反射正常的健康白色雄性豚鼠30只，体重250～3009；按原始体重由小至大编号后，随机分为生理盐水对照组(NS组)、庆大霉素对照组(GM+NS组1及神经生长因子实验组(GM+NGF组)，每组10只(20耳)。其中NS组10只豚鼠作为电镜

4、观察的正常对照标本，该组实验豚鼠腹腔注射生理盐水lml／kg-d，连续4周；GM+NS组：腹腔注射生理盐水lml／kg·d，相隔15min～30min后腹腔注射庆大霉素120mg／kg·d，连续4周：GM+NGF组：腹腔注射NGF1000u／kg·d，相隔15min～30min后腹腔注射庆大霉素120mg／kg-d，连续4周。(2)听脑干反应(ABR)测试。实验开始前1天，测试豚鼠听脑干反应(auditorybrainstemresponse，ABR)，注射庆大霉素后开始每周测试ABR一次。听脑干反应测定，采用Keyponit型4通道脑干听觉诱发电位测试仪，测定豚鼠清醒

5、状态下的听脑干反应。记录电极置于颅顶部，参考电极和接地电极分别置于同侧和对侧乳突部，观测所有波形，以ⅡI波刚刚出现时的短声刺激强度的dB值作为ABR的阈值。(3)扫描电镜标本制作及观察。从3组中各选择3只豚鼠，取其左耳耳蜗作为扫描电镜观察对象。在每只豚鼠完成最后给药及听脑干反应测试后(实验开始后4周)立即断头，迅速提取双侧颞骨，在解剖显微镜下打开听泡，刺破圆窗膜，取出镫骨，蜗尖钻孔，2．5％戊二醛固定液行蜗内灌注，10％EDTA脱钙15天，4。C条件下在解剖显微镜下中文摘要用分离针剥除耳蜗骨壳，剥完后再用2．5％戊二醛液固定4h，然后用O．1mol／L磷酸缓冲液中漂洗3

6、次?每次10min，于1％锇酸中固定2h，再经磷酸缓冲液漂洗、乙醇梯度脱水和干燥，金属镀膜，再用扫描电镜观察耳蜗螺旋器毛细胞的结构变化。结果：(1)ABR阈值改变。受试豚鼠经腹腔注射庆大霉素(GM)120mg／kg·d连续4周后，观察其ABR阈值的改变，发现正常对照组无明显听力损失，GM+NS组和GM+NGF组均有听力损失，表现为ABR阈值上移，其中以GM+NS组最为明显，GM+NGF组较轻。腹腔注射庆大霉素停止后(实验开始后第4周)，GM+NS组豚鼠平均阈移为(67．023士2．367)dB，其中最大阈移达81．513dB。经统计学比较，腹腔注射庆大霉素全部结束后的第

7、1周、2周、3周、4周，GM+NGF组ABR阈值与GM+NS组相比，除腹腔注射庆大霉素结束后第1周外，均有非常显著性差异(PO．05)。但GM+NS组在腹腔注射庆大霉素结束后第4周ABR闽值已达(67．023士2．367)dB。(2)耳蜗螺旋器毛细胞结构的改变。正常对照组豚鼠耳蜗螺旋器内、外毛细胞形态正常、界限清楚、排列整齐、偶有缺失。庆大霉素对照组豚鼠耳蜗内毛细胞(innerhaircells，IHC)及3排外毛细胞(Outer