羊栖菜多糖对软脂酸诱导的l02细胞氧化损伤与凋亡的影响

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1、温州医学院硕士学位论文羊栖菜多糖对软脂酸诱导的L02细胞氧化损伤及凋亡的影响中文摘要目的1．利用体外培养的正常人肝细胞株(L02)，观察羊栖菜多糖(SargassumFusiformePolysaccharides，SFPS)对软脂酸(palmiticacid，PA)诱导的L02细胞氧化损伤及凋亡的影响。2．初步探讨羊栖菜多糖对软脂酸诱导的L02细胞氧化损伤及凋亡的作用机制。方法1．不同浓度的SFPS(0，25，50，100，200，400，800Ug／m1)及PA(O，O．25，0．5，1．0rmol／L)分别干预L02

2、细胞，四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测各组细胞的增殖活性，以确定羊栖菜多糖及软脂酸的有效浓度。2．不同浓度的SFPS(0，25，50，lOOpg／m1)预处理L02细胞24h，而后加入有效浓度的PA(O．5mol／L)干预48h，分别记作模型组、SFPS-L组、SFPS-M组、SFPS-H组，MTT比色法检测各组细胞的增殖活性。3．经第2步分组及处理，收集细胞，AnnexinV-FITC标记法检测细胞的凋亡。4．经第2步分组及处理，收集上清液及细胞，硫代巴比妥酸法(thibabituricacid，TBA)测定细胞内的丙

3、二醛(Maleicdialdehyde,MDA)含量，黄嘌呤氧化酶比色法测定上清液中的超氧化物岐化酶(Superoxidedismutase，soD)活性。5．经第2步分组及处理，收集细胞提取RN^，逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测凋亡调控基因Bcl-2和BaxmRNA的表达并计算其比值(Bcl-2／Bax)。结果1．SFPS不同浓度(O，25，50，100，200，400，800Pg／m1)干预24h，促进细胞增殖活性的作用在25"--'100pg／ml浓度范围内呈剂量相关性，100Ug／ml浓度组效果最明显。但随

4、着浓度继续增高此作用下降，当浓度为800IJg／ml时反而抑制细胞的增殖活性。PA不同浓度(0，0．25，0．5，1．0mmol／L)分别干预24h、48h，0．5ranol／LPA干预48h的增殖抑制率为35．1％，接近半数抑制率，且光镜下观察细胞形态，不会使细胞大量裂解死亡，可作为诱导细胞损伤的最佳浓度。2．o．5mmol／LPA干预48h的细胞存活率为(65．00±2．98)％，以此干预条件建立模型组。而在PA诱导细胞前，以不同浓度SFPS(25，50，100Pg／m1)预处理24h，即SFPS—L组、SFPS-M组

5、、SFPS-H组，可使L02细胞存活率分别提高至(69．97±3．09)96、(75．55±3．31)％、(84．10±3．69)％(均P(0．05)。5温州医学院硕士学位论文3．正常对照组的L02细胞凋亡率为(4．94-2．1)％；而模型组可诱导(39．8±4．7)％的L02细胞出现凋亡。SFPS预处理能够降低细胞凋亡率，SFPS-L组、SFPS-M组、SFPS-H组的细胞凋亡率分别为(35．5±5．2)％、(28．24-3．3)％、07．1±2．8)％，与模型组相比，均有显著的降低(均P<0．05)。4．模型组的上清液

6、中SOD活性明显低于对照组，预先加入不同浓度SFPS可增加SOD活性，其中50、100Ug／ml浓度组与模型组比较有显著性差异(均P(0．05)。模型组的细胞中MDA含量明显高于对照组，预先加入不同浓度SFPS的保护组均可减少肋A的含量(均P(0．05)。5．与对照组相比，模型组L02细胞BaxtuRN^的表达明显升高，Bcl-2mRNA的表达及Bcl-2／Pax明显下降(均P<0．05)。不同浓度SFPS预处理24h后，SFPS—L组对Bcl-2mP,N^表达的影响较小(P>0．05)，SFPS-M组、SFPS-H组的B

7、cl-2mRNA的表达明显升高(均P

8、ctofSargassumFusiformePOIysaccharidesonPalmiticAcid-inducedOxidativeInjuryandApoptosisofL02CellsAbstractobjective1．ToinvestigatetheeffectofSargassumFusi