靶向纳米脂质微泡超声造影剂制备及其体外寻靶能力实验的研究

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1、重庆医科大学硕士研究生学位论文靶向纳米脂质微泡超声造影剂制备及其体外寻靶能力实验研究摘要第一部分纳米脂质微泡超声造影剂制备及其显影效果实验研究目的：制备一种新型纳米级脂质微泡超声造影剂，并通过动物实验评价其显影效果。方法：将一定比例的二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二苯基磷酰基叠氮化物(DPPA)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)及甘油、甘露醇等混合均匀后，采用机械振荡法，制备一种新型纳米级脂质氟碳微泡声学造影剂；通过光学显微镜及电子显微镜观察测定微泡的形态、分散度、均一性及浓度，利用Malvern激光粒径检测仪及表面电位检测仪分别检测微泡粒径大小与分布、表面电

2、位等物理特性；经兔耳缘静脉分别先后团注相同剂量(3．0x109／ml，O．25ml／kg)的自制纳米脂质微泡造影剂和普通脂质微泡造影剂，动态观察兔肝脏实质回声增强情况，应用DFY型超声图像分析诊断仪对兔肝脏实质回声时间．强度曲线进行定量分析，评价其显影效果。结果：自制纳米脂质微泡造影剂大小均匀，平均粒径为(415．4士51．8)nln、平均表面电位为一(13．7士1．6)mV；经静脉注射资助渠道：国家自然科学基金面上项目(No：6060101I)，国家自然科学基金面上项目(No：30770565)．3重庆医科大学硕士研究生学位论文后，该纳米微泡造影剂能明显增强兔

3、肝脏的二维灰阶显像，与普通脂质微泡造影剂比较，其峰值强度略低、达峰时间较晚，但增强持续时间较普通脂质微泡造影剂长(尸均

4、分别检测抗体的生物素化程度和抗体生物素化后的活性；采用机械振荡法制备生物化纳米脂质微泡，通过生物素．亲和素系统，将生物素化纳米脂质微泡与生物素化抗体连接，制备靶向纳米脂质微泡超声造影剂，Malvem激光粒径检测仪及表面电位检测仪分别检测微泡粒径大小与分布、表面电位等物理特性，免疫荧光染色实验定性检测造影剂与抗体的连接情况，细胞结合实验检测其体外寻靶能力。4重庆医科大学硕士研究生学位论文结果：每分子抗体可结合的生物素分子数目平均为7个，生物素化抗体的活性与游离单抗相比未见明显降低(氏0．05)；靶向纳米脂质微泡平均粒径为(573．44-65．8)nm、平均表面电位

5、为一(31．7-4-1．6)mV，免疫荧光染色实验显示靶向纳米脂质微泡超声造影剂表面可见明亮的红色环状荧光，细胞结合实验显示其可与乳腺癌细胞特异性牢固厶}厶；口口0结论：生物素．亲和素系统可使造影剂与抗体牢固结合，所制备的靶向纳米脂质微泡超声造影剂在体外具有较强的寻靶能力，为肿瘤的靶向性研究提供了前期基础。关键词：靶向，纳米，超声造影剂，乳腺癌，生物素重庆医科大学硕士研究生学位论文．EXPERIMENTALSTUDYoNPIU￡PARArrIoNANDTARGETINGFUNCTIoNINVITRooFTARGETEDNANO．LIPIDUIJRASOUNDCo

6、NTRASTAGENTABSTRACTPARTIEXPERIMENTALSTUDYoNPREPARATIoNANDENHANCEMENTEFFECTSoFNANo．LIPIDULTRASoUND．ENHANCEDCoNTRASTAGENTObjective：Toprepareanovelnano·-lipidultrasound--enhancedcontrastagent，thencompareitwithcommon—lipidmicrobubblesbyanimalexperimenttoevaluatetheenhancementeffects．Meth

7、ods：Acertainproportionofdipalmitoylphosphatidylcholine(DPPC)，distearoylphosphatidylcholine(DSPE)，diphenylphosphorylazide(DPPA)andmannitolweremixedinatube，incubated，丘eezedandthawedsometimesrepeatedly，thenthenano—lipidmicrobubbleswaspreparedbymechanicalvibration，itsbasephysicalproperti

8、eslikemorpho