表达ido的kupffer细胞在体内外对同种异体t淋巴细胞的凋亡作用

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1、声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢●意。本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导下取得的，论文成果归四川大学所有，特此声明。申请人指导教师耕勿仰四川大学华西『临床医学博士专业学位论文表达IDO的Kupffer细胞在体内外对同种异体T淋巴细胞的凋亡作用摘要目的：探讨表达

2、DO的KC在体内外对同种异体T淋巴细胞增殖的抑制和凋亡作用。方法：联合链酶蛋白酶和胶原酶在体灌注和离体消化的方法分离小鼠KC，实时荧光定量PCR检测经口烈叫处理或未处理的KC表达IDOmRNA和FasLmRNA的情况。高压液相色谱仪分析IDO对色氨酸的分解作用以了解其活性。3壬I嵌入增殖试验检测KC对同种异体T淋巴细胞增殖的抑制情况。流式细胞仪分析KC对同种异体T淋巴细胞的细胞周期和凋亡作用。构建BABL／c—C57BL／6的皮肤移植模型，分为KC(未处理)、KC(IFN-1,处理)、KC(1一MT)及生理盐水组，除了生理盐水组外，于移植术前1

3、4、7、2天给受体输入供体KC，同时1一MT组于移植术后O～7天经腹腔注射1一MT(O．9mg瓜g／a)，观察各组别对皮肤移植物存活时间的影响。于移植术后第7天每组各取1只行小鼠皮瓣HE染色和TUNEL以检测淋巴细胞浸润和凋亡情况。Kaplan-Meier对数秩检验对各组进行生存分析。结果：实时荧光定量PCR提示KC并不组成性表达Do'但是经IFN-T处理后，]DO和FasL在6h后表达量相对较高。D0能降低培养基中色氨酸的浓度，升高其代谢产物犬尿氨酸浓度。表达IDO的KC能明显抑制同种异体T淋巴细胞的增殖，但1-MT和抗FasL抗体能部分阻断

4、其增殖抑制作用，并且存在剂量依赖关系。表达IDO和FasL的KC能阻止同种异体T淋巴细胞于G1中期，诱导其凋亡。输入表达IDO和FasL的四JII大学华两临床医学博+专业学位论文KC能明显延长BABL／c—C578126皮肤移植模型中皮肤移植物的存活时间，1一MT能阻断此效应。结论：表达IDO和FasL的KC在体内外能抑制同种异体T淋巴细胞的增殖并诱导其凋亡。除了Fas—FasL途径外，IDO在KC维持外周免疫耐受中发挥重要作用。关键词：Kupffer细胞；IDO：FasL；免疫耐受；淋巴细胞；皮肤移植；小鼠2四川大学华西临床医学博士专业学位论

5、文InhibitionofallogeneicT-cellresponsesbyKupffercellsexpressingindoleamine2,3一dioxygenaseinvitroandvivoAbstract0bjective：Inthisstudyweinvestigatedkupffercells(KC)expressingindoleamine2,3-dioxygenase(Ⅱ'O)intheinhibitionofallogeneicT-ceUproliferationafterantigen—specificinterac

6、tioninvitroandvivo．Methods：Real—timePCRinvestigatedtheexpressionofIDOmRNAandFa；LmRNAinKCstreatedwith伍N—yornot．Highperformanceliquidchromatography(HPLC)analyzedthecatabolismoftryptophanbyIDOfromKCs．AllogeneicT-cell础印oIlsewasusedtoconfirmtheinhibitionofKCinvitro．Theproliferati

7、onoflymphocyteswasdetectedusing3In]thymidine(3HTdR)incoporation．Cellcycleandlymphocytesapoptosiswereevaluatedbyflowcytometricassay．BABL／cskinWastransplantedtoC57BIJ6．DonorKCswereinjectedi．v．atdays14，7，2beforetransplantation．Hematoxylin(HE)andinsituterminaldeoxynucleotidyltra

8、nsferasecatalyzeddUTP-digoxigeninnick—endlabeling(TUNEL—AP)wereusedtoidenti