抗寒相关基因cbf3、ice1以及atgols3的转基因拟南芥耐寒效果评价

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1、摘要低温冷害使许多植物生存受到严重危害，全球每年因低温冷害造成的农作物损失高达数千亿元，提高植物抗寒能力的研究具有重要的理论意义和现实意义。本研究采用PCR方法从拟南芥@阳6翻叩s括珐础以胛矽中分离受低温诱导的CB丹(C—repeatBiIldingFactor3)、脱jnnducerofCBFExpression1)、4≠∞糨他油idopsisGalactinolsynmaSe3J三种抗寒相关基因和CB乃冷诱导启动子CP。将CP．CBF3置于植物表达载体pCAMBIAl300中，构建侧基因冷诱导表达载体pCA．CP．CBF3；然后将带有组成型启动子的肌醇

2、半乳糖苷酶基因么fG，D鼬和抗寒基因J『CEJ分别合并于pCA．CP．CBF3中，构建了两个双基因植物表达载体pCA．CP．CBF3—35S．AtGolS3和pCA．CP．CBF3．35S．ICEl，其中C"基因冷诱导表达，彳fGD册和亿匹J『基因过量表达。以上三种重组质粒转入农杆菌GV310l中，并利用真空抽滤法导入拟南芥中，经50m班的潮霉素(Hyg)抗性筛选，得到T4代单拷贝插入纯合子植株。将野生型拟南芥与耐寒基因转基因拟南芥纯合子从RT-PCR、叶绿素含量、相对电导率和脯氨酸含量等四个抗寒性生理生化指标进行抗寒性评价。实验结果表明，单基因pVKH．

3、35S—AtGolS3转拟南芥和联合双基因pVKH．35S-CBF3-35S—AtGolS3转化拟南芥的抗寒能力均比野生型拟南芥强；而联合双基因转化拟南芥的抗寒能力又比单基因转拟南芥强。关键词：CB乃基因jCZj基因彳fGo五站基因拟南芥抗寒性AbstractColdisasevere是ctortoa氐ctpl觚tsurvival．EVeryye碣hulldredsofbillionsRMBhavebeenlostincropscausedbycoldhurtinthe、vord．Thus，improVementofplantcoldtoler觚ceiss

4、i鲥矗cant．Inthisresearcbthreegenesof∞乃、彳fGD埘and观Jgenesrelatingtocoldtolerance，andonec01dinduciblepromoterofCPatupstreamofC召F3wereisolated丘om么，．口6f矗印s括珐口Z幺聍口bylmPCR．ThecombmationofCP-CBF3waSinsertedt0theplantexpressionvectorofpCAMBIAl300，whichresultedinpCA．CP．CBF3．彳，GDZS3and伦Ejwith35

5、SpromoterwereinserteddownstreamofCP．CBF3，respectively；WhichproducedtwoBi-geneexpressingVectorsofpCA．CP．CBF3．35S．AtGolS3andpCA-CP-CBF3·35S·ICEl．Thethreeexpressionvectorsweretransformedinto彳朋撕叠唧括砌口妇，z口byvacuuminfiltrationandselectedontheMSmediumwith50mg兀Hy伊omycin．ARerthreegeneration

6、s，severalsignallocusandhomozygote1inesfbreachexpressingVectorhaVebeenobtained．Theevaluationofcoldtoleranceint啪sgenic缸abidopsisofpCA—CP-CBF3，pCA．CP．CBF3．35S．AtG01S3andpCA．CP．CBF3．35S—ICElhaSbeendonet11rou曲comp撕nggeneexpression，relatiVeelectricalconductiV时andthecontentofchlorophyUan

7、dpr01inewitllthatinwildtypeArabidopsis．Theresultsshowed廿1atmec01dt01eranceof仃孤sgellicmabidopSisofpVKH-35S-AtGolS3觚dpVKH一35S—CBF3-35S—AtGolS3wasstrongert11anwildtypeCol啪bia；meaIlwllile，matwaSstrongeriIldi—geneexpressingp础idopsisthaninsingle—geneexpressingATabidopsis．Keywords：C!引叼ge

8、ne：彳fGo五四gene；J∞Jgene；爿阳6谢叩s缸珐口肠”