高效重组spltmnpv的构建和筛选

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1、一苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在——L月解密后适用本规定。非涉密论文叫论文作者签名：导师签名：日期：?D，

2、1．4．墨日期：誓兰!：竺：e∑商效重组spltMNPV的构建和筛选中义摘要中文摘要斜纹夜蛾(印P却胞朋胁“r口)是一种杂食性农业和林业害虫，国外主要分布于朝鲜、日本、印度、澳大利亚等国，在我国各省、市、自治区均有发生，其寄主范围极广，能够危害109科389种寄主植物，是各种农作物和绿化植物的重要害虫。尽管斜纹夜蛾核型多角体病(印。而p阳朋胁删multicapsidnucleopolyhedroviruse，SpltMNPV)已在中国商品化并大规模用来控制棉花叶虫，但它缓慢的杀虫速度、较窄的宿主范围、对紫外线敏感等特点限制了其在全国范围的推广。因此，开发

3、高效重组SpltMNPV杀虫剂显得同益迫切。SpltMNPV日本株(C3)(又命名为SpltMNPVII)是K锄iya等从日本全国各地野外感病幼虫收集、分离到189个SpltMNPV克隆中繁殖率和毒力极强的一种新型病毒株。本研究在SpltMNPVII的基础上成功构建并筛选了呼缺失的，表达砌幻勋l成熟肽的重组SpltMNPV，并测定其生物学活性。主要研究成果：1．运用分子克隆方法构建了重组转移载体Psk·A呼·印办·绍勿·印^-曰肌K胁l，载体质粒和SpltMNPVII基因组DNA共转染SpLi细胞，经多轮荧光斑法和有限稀释法相结合成功筛选出重组病毒Spl

4、tMNPV-A馏f—P砷-昭勿-印办·BmKJr砌l，并测定其生物学活性。和野生型病毒相比，在病毒浓度为107polyhed耐larVa时，重组SpltMNPV-APg，一印办-P罟勿一印Ji，-曰聊K仃

5、口l的杀虫速度提高了50％。2．运用分子克隆方法构建了重组转移载Psk—AP∥一即厅一馏勿-fP-l-召朋K，死l，载体质粒和SpltMNPVII基因组DNA共转染SpLi细胞，经多轮荧光斑法和有限稀释法相结合成功筛选出重组病毒SpltMNPV-AP∥-印厅-Pg瑶卜把-1-B肌K，忍l，并测定其生物学活性。和野生型病毒相比，在病毒浓度为107poly

6、hedra／lan，a时，重组SpltMNPV·AP∥-印向·Pg勿·fP·1-B聊K，砌l杀虫速度提高了23％。3．运用分子克隆方法成功构建了B聊肼砌l和P咖融合表达的重组转移载体Psk·A99f一印厅-B朋尉砌l-噶勿。载体质粒和SpltMNPVlI基因组DNA共转染SpLi细胞后发现荧光细胞，但经一轮筛选后荧光消失。中文摘要高效重组SpltMNPV的构建和筛选成果在进一步研制高效斜纹夜蛾重组生物杀虫剂中具有重大意义。关键词：SpltMNPV；砌K胁l；印蛳P-1；Pg，IJ作者：汤欣欣指导老师：朱江教授Construct锄dpuri黟theefTi

7、cientrecombin锄tSpltMNPVAbstractConstructandpuri矽theecientrecombinantSpltMNPVAbstract跏(扬p，P厂口，打甜，．口isakindofomniVorouspests、^，hichd锄agesagricultur℃andforestry．1tmainydistributedinChina，Korea，Japan，India，AustraJiaandsoon．Ith硒awiderangeofhostandcand锄age109Section389kindsofplants．The

8、ref；引re，印P却胞，口，f，删is锄importantcmps锄dgreenplantpests．印D咖pfP朋，f，w口multinucleoc印sidnucleopolyhedroViruses(SpltMNPV)h嬲beensuccess如llyappliedin12urgescale嬲acommercialbiologicalinsecticideagainStthecottonleafwonninChina．Butitsslowlykillingspeed，narrowhost啪ge，UV-sensitiVe，etClimititSpro

9、motionttlroughoutthecountry．Thus，deVelop