兔出血热病毒重组疫苗构建和筛选

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1、⑨硕士学位论文MASTER’STHESISConstructionofRecombinantRabbitHemorrhagicDiseaseVirus(Rat)v)VaccineusingMyxomaVirus㈣asaVectorAThesisSubmittedinParcialFulfillmentoftheRequirementsFortheM．SDegreeinMicrobiologySupervisor：，ByGuoZhenPostgraduateProgramInstituteofEntomology

2、CentralChinaNormalUniversity渊枷干’—JAcademicTitle：ProfessorAppprovedMay2011⑨硕士学位论文MASTER’STHESIS华中师范大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。作者签名：日期

3、：>修，，年石月≥日学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解华中师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华中师范大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后遵守此规定)保密论文注释：本学位论文属于保密，在——年解密后适用本授权书。非保密论文注释：本学位论文不属于保密范围，适用本授权书。作者签名：日期

4、．刀，，年占月Z日导师签名：硐撕I／日期：zol1年易月2一日本人已经认真阅读“CALIS高校学位论文全文数据库发布章程"，同意将本人的学位论文提交“CALIS高校学位论文全文数据库’’中全文发布，并可按“章程"中的规定享受相关权益。回童途塞握变卮进厦!旦坐生；旦二生；旦三生蕉查!作者签名：匈哌日期：砌，，年‘月≯日导师签名：训细于1日期：伽、1年6月乙日摘要兔出血症是由兔出血症病毒所致的一种急性、高致死性传染疾病，以全身实质器官水肿、出血性变化及淤血为主要特征。该病首先于1984年在我国爆发，随后迅速蔓延到世

5、界各地，感染兔出血热病毒RHDV的兔子常在48-72小时内死亡。RHDV病毒粒子呈球形，无囊膜，直径32．36rim，20面体对称。其基因组为单股正链RNA，全长7437bp，有两个开放阅读框。ORFl占整个基因组的94％，编码一个进一步分解为结构蛋白和非结构蛋白的多聚蛋白。其中衣壳蛋白为主要的结构蛋1刍(5305．704Int)，称为VP60。兔黏液瘤病(Myxomatosis)和RHD一样是严重影响欧洲兔群的两大疾病。其中MV为专一感染兔的痘病毒。该病毒属于痘病毒科，野兔痘病毒属，痘病毒含有能够被真核细胞识

6、别的启动子，这些启动子不但可以启动基因工程中常用的一些标记基因的表达，而且还能够引发克隆的外源基因的表达。痘病毒经过改建后，可以发展成为表达外源基因的分子载体。本研究用兔粘液瘤病毒作为重组病毒载体，以粘液瘤病毒的非必须基因MST3N基因为同源重组位点，通过同源重组，制备能同时抵抗兔出血热病毒和粘液瘤病毒两种病毒的重组疫苗。这种重组疫苗表达兔出血热病毒RHDV的主要衣壳蛋白VP60和筛选标记GFP。通过筛选标记GFP在荧光下筛选重组病毒，经过几轮空斑筛选，分离纯化重组病毒。与野生型病毒相比，MST3N基因被敲断了

7、的重组病毒在RKl3细胞中的复制并未受到影响。皮下注射重组病毒疫苗后，被注射兔子血清内产生了RHDV抗体，并且能抵御毒力最强的粘液瘤病毒毒株的攻击。‘．’关键词：兔出血热病毒；兔粘液瘤病毒；同源重组；疫苗⑨硕士学位论文MASTER’STHESISAbstract，nleRabbitHemorrhagicdisease(RHDwhichcausedbyRabbitHemorrhagicdiseasevirus(RHDV)iSanacuteandhighlycontagiousdiseasewithahighrat

8、esofdeath．n蟛diseasewasfirstreportedinChinain1984andthenalsoreportedinotherpartsoftheworld．Infectedrabbitsusuallydiewithin48to72hofnecrotizinghepatitis．，n圮virioncontainsa7．4Kbsingle．strandedposit