厄贝沙坦对糖尿病大鼠足细胞的保护作用与其可能机制

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1、硕士学位论文厄贝沙坦对糖尿病大鼠足细胞的保护作用及其可能机制硕士研究生：朱艳指导老师：沈洁教授摘要研究背景糖尿病肾病(D№是糖尿病(DM)危害最大的微血管并发症之一，确切的发病机制尚未完全阐明。肾小球脏层上皮细胞，即足细胞(podoeyte)损伤改变在糖尿病肾病出现蛋白尿及发展过程中起重要作用。DN早期即出现足细胞损伤，进一步发展为出现蛋白尿，加速肾脏病变进展。目前关于在糖尿病肾病早期足细胞损伤的机制并不十分清楚。近年来已认识到足细胞上某些蛋白分子参与信号的传递，对维持足细胞正常结构起着重要作用，它们的突变或缺失可导致足细胞结构和数目改变，引起蛋白尿和肾小球硬

2、化的发生。a3131整合素是足细胞粘附于肾小球基底膜(GBM)的主要粘附分子，参与维持足细胞正常形态、GBM通透性和足细胞内外信号的传导。予足细胞帕pl整合素拮抗剂，足细胞与细胞外基质粘附力下降，凋亡增加。a3或Bl整合素缺失鼠肾脏肾小球基底膜断裂层化，滤过屏障受损，足突退化，足细胞密度严重减少，产生大量蛋白尿。糖尿病患者或糖尿病大鼠足细胞整合素∞Bl整合素的表达受抑，并随病程的延长、血糖的升高，这种抑制作用加重。有研究显示机械应力、血管紧张素II、转化生长因子B1、活性氧等均可调控足细胞们pl整合素表达。厄贝沙坦(Irbesatan)是一种高选择性的血管紧张

3、素II(AngII)的ATl受体拮抗剂(ARB)，大量基础临床证据显示厄贝沙坦可选择性与AngII1型受体结合，阻断AngII一醛固酮系统的生物学效应，通过阻断肾小球出球小动脉的AngII受体导致出球小动脉扩张，直接降低肾小球灌注压减少尿蛋白滤过还可阻中文摘要断AnglI介导的增大肾小球滤过膜孔径的作用，改善滤过膜通透性，减少蛋白漏出，且其肾脏保护作用呈剂量依赖性。因此我们提出以下假设：厄贝沙坦的剂量保护效应可独立于降压作用外，通过调控肾脏局部AngII影响肾组织a3131整合素表达，减少足细胞丢失，进而改善滤过屏障受损、延缓糖尿病肾病病变。本研究拟通过整体研

4、究，予不同剂量厄贝沙坦干预糖尿病大鼠，观察肾脏局部AngII、肾组织a3131整合素、肾小球足细胞密度变化，阐明各因素的相关性，为厄贝沙坦剂量相关的肾脏保护作用机制提供部分动物实验依据，为糖尿病肾病预防与应对措施提供新思路。第一章厄贝沙坦对糖尿病大鼠独立于降压以外的肾脏保护作用及其剂量相关性探讨【目的】l、观察不同剂量厄贝沙坦对STZ诱导的糖尿病大鼠尿微量白蛋白排泄率、肾小球足细胞数量、肾脏病理的影响；2、探讨厄贝沙坦降压以外的肾脏保护作用及其剂量相关性。【方法】1、糖尿病大鼠模型的制备和分组：63只雄性Wistar大鼠(南方医科大学实验动物中心)，体重240

5、"-'2809。按体重分层后随机分为3组，分别为正常对照组(Ctr!组，n=7)、糖尿病对照组(DM组，n=14)和药物干预组(n=42)。禁食过夜后，糖尿病对照组和药物干预组大鼠56只一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)55mg／kg，72小时后剪尾取血，测尾血全血血糖>16．7mmol／L作为糖尿病模型。造模过程中，DM组死亡3只，药物干预组死亡6只。药物干预组糖尿病大鼠按体重再次随机分为4组，于造模成功4周后分别给予25mg／kg·d厄贝沙坦(DM+Irb25组，n=9)、50mg／kg·d厄贝沙坦(DM+Irb50组，n=9)、200mg／kg·d厄贝沙

6、坦(DM+Irb200组，n-9)和30mg／kg·d肼屈嗪(DM+HydII硕士学位论文组，n=9)干预8周。造模后前4周，对血糖值7>30mmol／L的糖尿病大鼠予皮下注射长效胰岛素来得时(Sanofi．anvitis公司，法国)，2"-'4IU／隔日，以避免酮症的出现和保持大鼠生命活力。2、厄贝沙坦(Sanofi．anvitis公司，法国)及肼屈嗪(Sigma，美国)用药量根据大鼠体重计算。溶于清洁饮水中灌胃给药，每天一次。正常对照组和糖尿病对照组给予相应体积饮水灌胃。所有大鼠饲养于恒温清洁环境(南方医科大学实验动物中心)，自由进食及饮水。3、给药前及给

7、药8周后，采用Powerlab生物信息采集系统(Adinstrument，澳大利亚)测大鼠尾动脉收缩期血压，待大鼠充分平静后，连续测鼠尾动脉收缩期血压三次，取其平均值为该鼠收缩期血压值。4、标本的留取：给药8周后，大鼠放入代谢笼，留取24小时尿液，计量尿量，尿液离心30分钟(412，4000rpm)，取上清分装后于．70"C冻存，用于尿肌酐及尿微量白蛋白的检测。大鼠麻醉后，经腹主动脉插管，4℃PBS灌注后取肾脏。迅速剥去肾包膜，称量肾重后纵向剖开肾脏，切取约0．5x0．5x0．2cm3大小的肾脏组织，置于lO％中性福尔马林缓冲溶液中固定24小时，剩余部分放入冻

8、存管中液氮保存。。．5、尿微量白蛋白排