金安粉诱导肺癌细胞凋亡作用与对survivin通路的影响

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1、原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立完成的，文中除注明引用的内容外，不包含其他已经发表的科研成果。对本文研究做出重要贡献者，已在文中以明确方式表明。本声明的法律责任完全由自己承担。论文作者签名蓥主光导师签名鉴送生El期2竣亟=5=墨关于学位论文使用授权的声明本人完全知道中国中医科学院有关保留使用学位论文的规定，‘同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权中国中医科学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存

2、和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵此规定)套安粉诱导肺癌细胞胡亡作用及对survivin通路的影响中文摘要肺癌为当今世界大多数国家发病率居第一位的恶性肿瘤．从20世纪中叶开始其发病率和死亡率呈逐年上升，目前治疗效果差，化疗药物疗效不理想，且毒副作用大，延长肺癌患者的生存期，提高患者的生存质量，已成为防治肺癌的最主要目标和难题“’。近年来对于中药单体的研究表明：多数中药单体单独抑瘤作用并不如化疗药显著，但国内外多项研究已表明，中药复方多种成分混合作用于人体对于稳定瘤灶，消除亚临床病灶，提高术后中位生存期有显著的作用”“。

3、选用有确切活性成分和疗效显著的中药复方进行研究，能够展现中医药防治重大疾病的巨大作用，从而为医学界所关注．Survivin是迄今发现的最强凋亡抑制因子，也是当前肿瘤凋亡研究领域中的热点嘲，国内个剐学者已开始了中药对该靶点的影响，但系统研究还未开展；金安粉是一种由四种单体组成的混合物，主要含苦参碱、氧化苦参碱、黄芪多糖、川芎嚷等成分，其配比是在4蠡床对于肺癌术后患者防复发转移行之有效的中药配方的基础上，经过前期动物体内正交实验得到抑瘤最佳组分配伍比例。前期药效学动物实验发现该药的抑瘤作用明显，可提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，对

4、ConA诱导的脾淋巴细胞增殖有明显影响，并有较好的抗Lewis肺癌移植瘤肺转移的作用睁”。前期毒性试验实验证明其具有稳定、安全，无明显骨髓抑铹作用，前期的单体组分体外药效学实验表明：金安粉的活性成分均具有直接或闯接的抑癌效果“’．前期探讨金安粉对C57BL／6J小鼠Lewis肺癌的抻制效应及其作用机锚的结果表明：金安粉各剂量缎的抑瘤率依次为45—799b、40-90％、32-48％，流式缏胞仪检测盒安粉诱导肿瘤细胞的凋亡率分别为24—19％、14—95％和13-93％，并经统计学分析发现金安诱导肿瘤细胞的凋亡率与剂量之间存在

5、依犊关系。前期动物实验表明，金安粉具有抑制小鼠Lewis肺癌移植宿体内生长作用；促进肿癌细胞碍亡可能是金安粉治疗Lewis肺癌的主要作用方式。前期体内体外的药物筛选实验证明．在体外培养PG．PAa肺癌细胞，金安粉可显著抑制两种细胞的生长．在荧光显微镜、激光共聚焦显徽镜以及透射电镜下均可见典型的凋亡形态改变，结果表明：金安粉抑制肿瘤细胞生长可能是通过改变细胞周期，诱导肿瘤细胞凋亡等途径来实现的。本试验旨在开展金安粉诱导中国中医科学院2003级博士研究生学位论文肺癌细胞凋亡的研究及对于Survivin基因的所在的凋亡通路的影响，

6、来探讨中药复方诱导凋亡的具体机制，分三部分进行。第一部分金安粉对肺癌细腿株的抑制作用目的：研究金安粉对肺癌细胞株A549和H446的抑制作用，筛选出对肺癌细胞株A549和H446敏感的药物浓度，同时观察中药同化疗药物合用的作用效果。方法：本研究通过MTS试验，研究不同浓度金安粉、各组成药物单体、VP．16、PDD，及金安粉配合PDD、金安粉配合VP．16在不同的时问对肺癌细胞株A549和H446的抑制作用，计算药物对不同细胞株的抑制率。筛选金安粉敏感作用浓度．结果：金安粉对肺癌细胞株A549和H446均有不同程度的抑制并呈现

7、一定的浓度和时间依赖性。金安粉200,．,8／nd、250ug／nd、300ug／ml、350ug／ml、400u∥ml对A549细胞24PJ',时的抑制率分剐为45．3％、49．2％、55．8％、68．7％、77．2％：金安粉200ug／mi、250ug／ra、300eg／nd、350ug／mt、400ug／ml对H446细Jll24'J"时的抑制率分别为39．6％、43．8％、49．S％、62．3％、75．7％。肺癌细胞株A549作用24,b时的IC50为250ug／ml。金安粉对H446肺癌细胞株24,J,时的IC50

8、为300ug／ml，金安粉配合化疗药物作用效果最强．抑制率最高可达98．5％。结论：金安粉(200-400u8／=1)对肺癌细鹰鸯A549、H446具有增殖抑制作用，且比同剂量任何单一成分的作用明显，提示各组成单昧药混合在一起具有协同抑制肺癌细胞小细胞H446和非小细胞A,549增殖效应，