金安粉针剂诱导肺癌细胞凋亡及其分子机制分析

《金安粉针剂诱导肺癌细胞凋亡及其分子机制分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中文摘要金安粉针剂诱导肺癌细胞凋亡及其分子机制研究中文摘要研究和实践证实：许多中药可以发挥直接的抗肿瘤作用。金安粉针剂是在临床实践基础上，依据中医理论，由黄芪、苦参、川芎等组方，经提取而制成的中药复方粉针剂，在前期小鼠药效实验中表现出良好的抑瘤率，而且其生药组成黄芪、苦参均有诱导肿瘤细胞凋亡的作用的报导。本文就金安粉针剂技金安与顺铂合用抑制肺癌细胞生长、诱导其凋亡及其分子机制进行深入研究。为临床应用中药治疗肿瘤，提高患者生存率，为探索中西医结合治疗肿瘤的规律，提供科学依据。本研究包括四部分：(1)从整体动物水平对金

2、安诱导小鼠肺癌细胞凋亡的形态学研究；(2以细胞水平直接观察佥安对体外培养Pc、P^a肺癌细胞系诱导凋亡的形态学改变；(3硷安诱导体内肺癌细胞凋亡的分子机制的初步研究；(4)金安诱导体外肺癌细胞凋亡的分子机制深入研究。整体动物实验分为六组：生理盐水组(1{s)、金安高剂量组(JAfI)、金安中剂量组(JAM)、金安低剂量组(JAL)、顺铂组(DDP)和金安与顺铂台用组(DJ)。体外培养肺癌细胞PG和P衄细胞系均分为四组：空白对照组(c)、顺铂组(Df】P)、金安组(JA)和金安合用顺铂组(DJ)。我们应用了双荧光染色

3、、1UN臣法、腻^Ladder检测、激光共聚焦扫描显微镜和透射电镜等从形态学角度观察了中药佥安粉针剂以及金安与化疗药顺铂合用诱导体内外肺癌细胞发生凋亡的形态学改变，进一步在细胞水平应用了AnnexinV和PI染色以及免疫荧光抗体等通过流式细胞仪定量检测细胞早晚期凋亡率和细胞周期改变以及线粒体膜电位、细胞内Ca’和P}I值等的变化、同时在整体动物和体外培养细胞，我们采用了免疫组化、原位杂交以及RT--P6R等方法以检测细胞凋亡信号转导途径中，部分关键成分Fas／FasL、Caspase--3以及重要的上游调控基因bc

4、l-2／bax和p53表达的改变规律。主要实验结果如下：1、金安和金安合用顺铂抑制肺癌生长效应与诱导癌细胞凋亡、阻滞瘤细胞周期有关整体动物实验表明：在15009／kg、lOOmg／kg、50mg／kg剂量作用下，金安表现出明显的抑制肿瘤细胞生长的作用，其抑瘤率依次为45．79{6、40．90}；、32．48％，并可使小鼠体重增加。在光镜、电镜、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下可清楚地观察到凋亡细胞的特征形态改变，表现为核固缩或染色质边集或凝集里大块状，并可见凋亡小体。进一步提取llN进行电泳发现J^}I组可见DN^L

5、adder条带。流式细胞仪检测金安各剂量组的凋亡率分别为24．1956、14．95％和13．93％。珊崛L法检测各组凋亡指数(kI)为：J舭0．43±5．62，J舭4．00士7．15，J札．1．14土1．90。流式细胞仪检测分析DNA含量发现金安各组s期细胞比例增高，GfM期细胞明显减少。盎安粉针剂诱导肺癌细胞凋亡及其分子机制研究在体外培养PG、PAa细胞，金安在300“g／ml可显著抑制两种细胞的生长，在荧光显微镜、激光共聚焦显缁谎以及透射电镜下均可见典型的凋亡细胞形态改变。流武细胞仪分析PG细胞各组细胞周期的主

6、要表现为s期细胞增多，Gz／M期减少、PAa细胞各组细胞周期的主要表现为吖G，期细胞增多。AnnexinV染色结果提示PG细胞DJ组的旱晚期凋亡率均高于DI)P和JA组，金安对PAa细胞的诱导凋亡率低。进一步提取细胞DNA并电泳发现：PG各组均有DNALadder，但DJ组最明显，而PAa细胞各组均未见。m皿检测各组凋亡指数(AI)分别为嗽3．30±1．22，PGI班．16．35±4．53，P(IJA：12．514-2．44，P姒17．31士3_51，眦2．77±n6l，PADI)P：．4．00士2．4l，PAIA

7、：l94土1．45,PADJ：2．58±1．03。因此，金安抑制肿瘤细胞生长是通过改变细胞周期，抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等途径来实现的。2．金安有使线粒体肿胀，降低其膜电位和细胞内m镛渡、增加细胞内州值的作用在体内外实验均发现，金安使肺癌细胞在超微结构上出现线粒体肿胀，膜间隙增宽，甚至严重的空泡化，而内质网无明显改变。金安在体外培养细胞有降低线粒体膜电位和细胞内ca锄渡以及增加细胞内pIl值的作用，并且与DI)P有协同作用。因此，金安和金安合闸顺铂诱导肺癌细胞凋亡的过程中有线粒体凋亡途径的参与。3_金安有

8、增加肿瘤细胞凋亡执行器Cas埠se--3、死亡受体Fas、凋亡诱导基因p53、ba】【mRNA的表达，降低肿瘤细胞FasI,以及凋亡抑制基因bcl--2删腿表达的作用通过免疫组化检测金安在体内外均可促进Caspase--3、Fas、P53和Bax蛋白的表达，降低FasL和Bcl-2蛋白的表达。原位杂交表明金安能促进b＆xⅡRM的表达，降低bcl-2Ⅱ】IlN