自体富血小板血浆体外培养兔骨髓间充质干细胞并定向诱导为成骨细胞的研究

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1、缩略词mBMSCsCDD缩略词表Abbreviation英文全称中文全称alkalinephosphatase碱性磷酸酶bonemarrowmesenchymalstemcells骨髓间充质干细胞clusterofdifferentiationopticaldensity抗原分化簇光密度DMEM．F12Dulbecco’SmodifiedEagle’s／DMEM-F12培养基DMSODOPCsFBSFCMFITCHEICCIOPCsMSCsMTTNBCSPASPBSPRPH锄’S—F12mediunldimethylsulfoxidedeterminedoste

2、ogenicprecursorcellsfetalbovineserumflowcytometryfluoresceinisothiocyanatehematoxylinandeosinimmunocytochemicalstaininginducedosteogenicprecursorcellsmesenchymalstemcellsmethylthiazolyltetrazoliumnew-bomcalfserumperiodicacid—schiffphosphatebufferedsalineplatelet·richplasma二甲基亚砜定向性骨祖细

3、胞胎牛血清流式细胞术异硫氰酸荧光素苏木精．伊红免疫细胞化学染色诱导性骨祖细胞间充质干细胞四甲基偶氮唑蓝新生牛血清过碘酸．希夫磷酸盐缓冲液富血小板血浆Ⅲ3洲3¨i¨¨¨i●1㈣5Ⅲ4哪8¨¨ii■●-ⅢY徐州医学院硕士学位论文自体富血小板血浆体外培养兔骨髓间充质干细胞并定向诱导为成骨细胞的研究中文摘要骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)具有多向分化潜能，是目前常用的骨组织工程种子细胞。研究表明移植的BMSCs数量越多，临床疗效越好。但BMSCs局部数量少，需经过体外培养扩增才能保证疗效。当前常以异种血清作为培

4、养基，如胎牛血清(fetalbovineserum，FBS)和新生牛血清(new-borncalfserum，NBCS)，若用于临床，则存在伦理学争议、传播疾病和潜在抗原性等问题。富血小板血浆(platelet—richplasma，PRP)是自体全血提取物，可保证相对安全性，且含有多种生长因子。本实验尝试采用自体PRP替代异种血清体外培养兔BMSCs，观察PRP对BMSCs体外增殖和诱导成骨分化的影响，探讨促进BMSCs的增殖和分化的新方法。第一部分自体富血小板血浆对兔骨髓间充质干细胞体外增殖的影响目的用自体PRP体外培养兔BMSCs，探讨PRP在BMSCs体

5、外培养增殖时对细胞生物学特性的影响。方法经兔耳中央动脉取血，两次离心法制备PRP。从兔髂骨穿刺抽取骨髓，密度梯度离心法富集BMSCs。将每只兔BMSCs分为PRP组、FBS组和无血清组，每组6例，分别采用10％自体PRP、10％FBS与无血清，配比DMEM．F12培养基和青、链霉素培养。观察细胞形态变化、检测各组细胞增殖活性并绘制生长曲线、细胞表型表达情况和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)活性。2，．土=’。‘0k徐州医学院硕士学位论文结果3组细胞均在接种后24h左右开始贴壁，并由圆形逐步变化为长梭形、多角形和不规则形等。3组细胞均随

6、培养时间延长而增殖，生长曲线呈“S”形，PRP组与FBS组细胞生长迅速，明显快于无血清组(P

7、。关键词骨髓间充质干细胞；富血小板血浆；组织工程。一。第二部分自体富血小板血浆对兔骨髓间充质千细胞体外诱导为成骨细胞的影响目的将自体PRP体外培养扩增的兔BMSCs，在诱导培养基作用下，定向分化为成骨细胞，并探讨PRP在BMSCs体外定向成骨分化中的作用。方法将第3"5代PRP组BMSCs，分为A、B两组，A组用含10％PRP和10·mol／L地塞米松、10之mol／Lp．甘油磷酸钠、50099／L维生素C的诱导培养基培养，B组继续用10％PRP培养；将第3"-'5代FBS组细胞，分为C、D两组，C组用含10％FBS和10。mol／L地塞米松、10。2mol／L

8、p．甘油磷酸钠、5009