鼠骨髓间充质干细胞诱导的成骨细胞与phbhhx复合培养

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1、《中国图书资料分类法》单位代码10660分类号：R783.1学号：S090487贵阳医学院2012届硕士学位论文鼠骨髓间充质干细胞诱导的成骨细胞与PHBHHx复合培养研究生：周祥文导师：王永教授年级：2009级专业：口腔临床医学2012年5月7日贵阳医学院2012届硕士研究生论文贵阳医学院2012届硕士学位论文鼠骨髓间充质干细胞诱导的成骨细胞与PHBHHx复合培养研究生：周祥文导师：王永教授年级：2009级专业：口腔临床医学本课题受以下基金资助贵州省科学技术基金黔科合J字[2010]2177号2贵阳医学院2012届硕士研究生论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„4前言„„„„„„„„

2、„„„„„„5材料与方法„„„„„„„„„„„„7结果„„„„„„„„„„„„„„12讨论„„„„„„„„„„„„„„18结论„„„„„„„„„„„„„„21参考文献„„„„„„„„„„„„„22英文摘要„„„„„„„„„„„„„24致谢„„„„„„„„„„„„„„25略缩词表„„„„„„„„„„„„„26论文原创性声明„„„„„„„„„„27附：综述„„„„„„„„„„„„283贵阳医学院2012届硕士研究生论文鼠骨髓间充质干细胞诱导的成骨细胞与PHBHHx复合培养专业：口腔修复学研究生：周祥文导师：王永教授【摘要】目的：探讨SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs)诱导的成骨细胞与3-

3、羟基丁酸/3-羟基己酸共聚物（PHBHHx)支架材料的体外相容性，进一步验证PHBHHx材料作为骨组织工程支架材料的可行性。方法：采用全骨髓贴壁筛选培养法分离成年SD大鼠BMSCs,经诱导培养后，进行细胞形态学观察，碱性磷酸酶活性及钙结节的鉴定。将诱导的成骨细胞与PHBHHx支架材料在体外复合培养，通过扫描电镜观察细胞与材料的复合情况，用MTT法检测材料对细胞黏附和增殖的影响。结果：成骨细胞可以在PHBHHx支架材料表面及孔隙中良好的黏附和增殖。结论：SD大鼠骨髓间充质干细胞诱导的成骨细胞与PHBHHx支架材料具有良好的体外相容性，PHBHHx是一种性能优良的骨组织工程支架材料。【关键

4、词】骨髓间充质干细胞；成骨细胞；PHBHHx4贵阳医学院2012届硕士研究生论文前言口腔种植技术与传统的修复方法相比，由于具有更接近于天然牙的功能和美学修复效果，在口腔临床中的应用越来越广泛，目前已成为修复牙列缺损或缺失的主要方法之一。然而，许多牙列缺损或缺失的患者由于缺牙后的生理性吸收、外伤性缺损等因素造成牙槽骨骨量不足而无法接受口腔种植修复。目前采用的骨组织引导再生术只能修复较小的骨缺损；自体骨移植虽然安全可靠，无免疫排斥，但易造成取骨部位的继发损伤，存在供骨区合并症的可能；异体骨移植能修复较大骨缺损，但存在免疫排斥。如今骨组织工程（Bonetissueengineering)已被

5、认为[1]是修复大段骨缺损最有希望的方法。骨组织工程是将患者或供者的特定细胞（干细胞、祖细胞）置于体外支架材料上生长，形成一个三维结构，然后移植到患者体内。种子细胞，支架材料，生长因子作为组织工程的三要素，在构建组织工程骨中有举足轻重的作用。种子细胞包括自体细胞、同种异体细胞、干细胞。自体细胞虽然安全可靠，但数量有限，且易造成继发损伤。同种异体细胞存在免疫排斥反应。干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能的细胞。根据来源不同可分为：胚胎干细胞和成体干细胞。目前，已经有大量的报道证实，几乎所有的成熟组织中都存在相应的成体干细胞，例如造血干细胞、脂肪间充

6、质干细胞、骨髓间充质干细胞等。由于成体干细胞不存在伦理学问题，且有着较好的多向分[2]化潜能，因而成为近几年的研究热点。骨髓间充质干细胞（Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)是来源于中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞。由于取材容易、易分离、体外可大量扩增，不存在免疫排斥反应、故已成为骨组织工程最常用的种子细胞之一。可吸收支架材料是骨组织工程的载体，为种子细胞的粘附、迁移、增殖分化以及分泌细胞外基质提供框架，作为屏障保护新生组织，防止周围组织向新生组织渗透，从而利于新生组织的再生。按来源可分为天然支架材料和人工合成材料。前者有细胞

7、识别，利于种子细胞粘附，可自然降解的优点，但因其有免疫排斥及批次间存在差异，临床应用较少。而后者具有统一性，并且可根据需要人工塑形，[3]故逐渐成为支架材料的主流。骨支架材料目前以聚乳酸、聚羟基乙酸及其共聚5贵阳医学院2012届硕士研究生论文物等为代表的高分子可吸收材料应用最为广泛。聚乳酸是美国食品药品管理局许可的可进行临床应用的高聚物之一。但由于其在体内降解生成乳酸，会造成局部PH降低，有可能引起局部的炎性反应，同时由于降解速度太快导致材料力