低氧环境和血管内皮生长因子-165对人胃癌细胞侵袭转移的影响

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1、中文摘要低氧环境和VEGFl65对人胃癌细胞侵袭转移能力的影响乐甬大字医字阮研究生袁翠林导师欧希龙目的：研究低氧环境和血管内皮生长凶子一165(VEGFl65)对人胃癌细胞中MMP一2及uPAmRNA和蛋白表达的影响，以研究VEGFl65对肿瘤侵袭转移的影响及其作用机制。本实验以腺病毒为载体，将VEGFl65转染至人胃癌细胞株BGC．823后，用低氧诱导剂氯化钴诱导产生低氧环境，观察转染了VEGFl65的人胃癌细胞在低氧环境下侵袭能力的改变，并检测细胞MMP．2及uPA表达的变化，从而在分子水平初步探讨低氧环境和VEGFl65因子对

2、人胃癌细胞MMP．2和uPAmRNA、蛋白量表达以及对细胞侵袭能力的影响及其机制。方法：利用腺病毒作为载体将已构建成功的、含VEGFl65／GFP基因的重组腺病毒(Ad—VEGFl65／GFP)瞬时转染人胃癌细胞株BGC．823，利用低氧诱导剂氯化钻进行低氧干预模拟低氧环境。实验分组：以VEGFl65基因瞬时转染后的人胃癌细胞株BGC．823再行低氧诱导剂干预的细胞作为低氧转染一组，以GFP基因瞬时转染后的人胃癌细胞株BGC．823再行低氧诱导剂干预的细胞作为低氧转染二组，以单纯转染VEGFl65基因的胃癌细胞为单纯转染一组，以单纯

3、转染GFP基因的胃癌细胞为单纯转染二组，以单纯低氧诱导剂氯化钴干预的胃癌细胞为单纯低氧组，以未转染未低氧干预的正常胃癌细胞作为空白对照组，采用Transwell小室行侵袋实验检测六组细胞的侵袭能力。利用半定量RT．PCR和Westernblot方法对六组细胞中MMP．2及uPA的mRNA和蛋白表达水平进行分析。结果：Transwell小室结果显示单纯低氧组细胞侵袭能力较空白对照组提高，而低氧转染一组细胞的侵袭转移能力与其他五组比较均明显提高，差异有显著性(P<0．01)，低氧转染二组、单纯低氧组及单纯转染一组相比较无明显差异(P>0

4、．05)，单纯转染二组与空白组比较无明湿差异(P>0．05)；RT．PCR结果显示MMP．2及uPA的mRNA的表达在单纯低氧干预组较空白对照组有所上调，差异有显著性(P<0．05)，而低氧转染一组要明显高于其他对照组及空白组(P<0．01)，低氧转染二组、单纯低氧组及单纯转染一组相比较无明显差异(P>0．05)，单纯转染二组与空白组比较无明显差异(P>0．05)；Westernblot检测MMP．2及uPA的蛋白量表达显示单纯低氧干预组较空白对照组要明显上调，而低氧转染一组较其他五组表达均明显上调(P<0．01)，低氧转染二组、单

5、纯低氧组及单纯转染一组比较无明显差异(P>0．05)，单纯转染二组与空白组比较无明显差异(P>0．05)。结论：低氧干预和转染VEGFl65均能提高人胃癌细胞的侵袭力，而低氧干预Ad．VEGFl65转染后的肿瘤细胞其侵袭能力较单纯低氧干预的细胞明显提高，低氧环境下转染VEGFl65能够明显提高人胃癌细胞BGC．823中MMP．2及uPA的mRNA及蛋白表达，提示VEGFl65在一定低氧条件下可通过上调MMP．2和uPA束促进肿瘤细胞侵袭能力。关键词：胃癌；VEGFl65；GFP：MMP．2；uPA；低氧；氯化钻；侵袭英文摘要Effe

6、ctsofVEGFl65andHypoxiaoninvasionofhumangastricCanCerCellMedicineCollegeofSoutheastUniversityGraduate：YuanCui．1in．Supervisor：0uXi．10ngAbstractobjective"ThisexperimentisdesignedtoevaluatetheeffectsofVEGF165andhypoxiaoncellinvasionandmetastasisofhumangastriccancercellline

7、BGC．823andtoinvestigateitsinfluenceontheexpressionofMMP一2anduPAofthecellsunderhypoxiaandthemechanismoftheregulationofthesetwofactors．BGC．823cellsweretransfectionwithAd．VEGFl65transientlyandtheninducedbyhypoxiamimiccobaltchloride．Thenevaluatetheabilityofmetastasisandthe

8、expressionofMMP．2anduPAofBGC．823cellsindifferentgroups．studythemechanismofinvasionandmetastsisongastriccancerunderhyp