利用malditof+ms技术检测乳腺癌患者血清蛋白指纹图谱并建立乳腺癌诊断模型

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1、08￡i．三li目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOO⋯3研究论文利用MALDI．TOFMS技术检测乳腺癌患者血清蛋白指纹图谱并建立乳腺癌诊断模型引言⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯······⋯·⋯··5第一部分基质辅助激光解析电离飞行时间质谱实验条件的优化前言···⋯⋯⋯⋯··⋯·⋯···⋯···⋯⋯···⋯⋯···--·⋯⋯⋯⋯···⋯···⋯7刖舌”“”””””一”””””一“”一“”一””一””一““一”⋯⋯””“”””’7

2、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果···························································。··················12附图、附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14讨{念··············································································19参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22第二部分利用MALDI．TOFMS

3、技术检测乳腺癌患者血清蛋白指纹图谱并建立诊断模型前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一····⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···24刖舀⋯一”⋯⋯”⋯”⋯‘”“”⋯”⋯⋯⋯⋯一”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”。24材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24结果⋯·······················⋯·⋯⋯························⋯··⋯······⋯·26附图、附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27讨论···············································

4、·······························34参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36综述蛋白质组学及其在肿瘤标志物筛选中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38致谢”““”““““““”““”“““”“““”一”””””⋯一”””””一”””⋯一50个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯O00@00eO00⋯⋯⋯51中文摘要利用MALDI．TOFMS技术检测乳腺癌患者血清蛋白指纹图谱并建立乳腺癌诊断模型摘要目的：利用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(matrix．assistedlaserdesorpt

5、ion／ionizationtime-of-flightmassspectrometry，MALDI-TOFMS)技术检测血清样本蛋白多肽表达图谱，分析clinprot实验方法的重复性及血清不同的冻融次数对实验结果的影响，以便建立MALDI．TOFMS检测方法用于后续试验；同时比较分析弱阳离子交换磁珠(MB．WCX)、铜离子螯合磁珠(MB．IMACCu)、疏水C8磁珠(MB．HICC8)进行血清蛋白多肽分离富集后图谱采集的差异，选取分离蛋白质能力强的MB．WCX对乳腺癌及健康对照组的血清样本进行检测，通过高通量分析软件进行数据处理，筛选

6、出乳腺癌和健康对照组之间的差异蛋白多肽质荷比峰，并建立乳腺癌诊断模型，进行模型验证确定诊断模型具有高度灵敏度和特异度，为临床寻找乳腺癌血清肿瘤标志物提供理论依据。方法：l采用MB．WCX分别对冻融1、3、5次后的血清样本分离提纯，经MALDI．TOFMS检测后比较其蛋白质图谱，以此判断冻融次数对实验结果的影响。2采用MB．WCX进行血清样本蛋白分离提纯，经MALDI．TOFMS检测后，选择不同分子量范围的9个蛋白重复测定，比较组间和组内变异系数以考察重复性。3比较MB．WCX、MB．IMACCu、MB．HICC8的平均出峰量、平均峰面积

7、和平均峰强度等参数，从而选取分离蛋白质能力较好的一种磁珠用于大量血清样本的提纯。4选择分离蛋白质能力较好的MB．WCX对乳腺癌及健康对照组的血清样本进行检测，然后用MALDI．TOFMS检测不同组患者蛋白质谱图并加以对比分析。研究过程中仪器操作、数据分析和图像采集分别用flexControlMS3．0、ClinProToolsTM2．1和flexAnalysis3．0软件。对所发现的差异蛋白计算识别率、预测能力和验证准确率，或差异蛋白组合后诊断的效果，以指导临床应用。中文摘要结果：1研究发现，样品的冻融次数在3次以内不影响质谱峰的采集，

8、没有显著性差异(胗O．05)，冻融次数越多，对小分子量蛋白或多肽的影响越大。2重复性研究表明，标准品变异系数范围在10．67％29．59％，混合样品变异系数范围在9．88‰30．07％，重复性很好。3相同样