夹竹桃三萜皂甙的提取分离纯化、灭螺效果与构效关系与化感作用机理研究

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1、摘要日本血吸虫病是严重危害我国人民身体健康，阻碍社会经济发展的重大传染性疾病，湖北钉螺是日本血吸虫唯一的中间宿主，因此灭螺是阻断和控制血吸虫病传播的重要手段之一。由于化学合成药物对人畜有毒，环境污染严重，所以灭螺植物资源的开发与利用，是目前灭螺药物研究的一个热点。在我们的前期的筛选研究中首次发现，夹竹桃提取物对湖北钉螺有明显的杀灭作用。为了进一步评价夹竹桃的灭螺作用，为开发新的灭螺药物和兴建人工抑螺林进行生态工程阻断传播提供理论支持，本文利用现代生物技术手段研究了夹竹桃三萜皂甙的灭螺效果与构效关系，揭示其灭螺作用的化感

2、作用机理。应用系统分离法得到采自不同季节韵夹竹桃的根皮、茎皮、时的三萜总皂甙，平均得率6．16"／,。通过浸杀钉螺实验，直线回归分析灭螺浓度一效应方程和时间一效应方程，并通过方程预测提取物达Lc船和L氏的浓度和时间。研究表明。12份三萜总皂贰均有一定的灭螺活性，其中夏叶三萜总皂甙活性最高，其Lc瘌Lc．o为10．62mg／L和81．02mg／L，同时，驱避实验也显示了较好效果，75分钟内驱避率达到100％。利用柱层析技术从夏叶三萜总皂甙中分离纯化了一种三萜皂甙，经波谱方法和化学分析相结合，确定其为一种单糖链齐墩果酸型三

3、萜皂甙。浸杀实验表明具有较好灭螺效果，而水解该皂甙获得的皂甙元却完全没有杀灭作用，可以推定单糖链的存在与灭螺效果密切相关。同工酶电泳分析表明，醣酶(EST)同工酶可以作为钉螺中毒的病理指标。钉螺中毒早期，经处理样品的酶活高于对照组。反映药物刺激EST的表达，增强钉螺肝脏的解毒能力；丽在中毒中后期，经处理样品匏酶活低于对照组，直至酶带完全消失。反映由于药物作用时间或强度超过其生理阈限，钉螺体内物质和能量代谢出现紊乱，从而抑制酶的合成。糖原和蛋白质分析结果表明，灭螺植物提取物能显著降低钉螺体内的总糖原和总蛋白含量，最大降低

4、幅度达37．8％和39．4％，这表明夹竹桃三萜皂甙可能通过影响钉螺的能量代谢水平和总蛋白水平从而抑制其生存。．关键词：夹竹桃，三萜皂甙，湖北钉螺，单糖链，酯酶同工酶AbstractSchistosomiasisjoponicoisamajorthreattotheheathofChinesepeopleandpreventssocialeconomiesfromdevelopment．Oncomelaniahupensisisauniquehostofschistosoma,eliminatingsnailsisthe

5、mostimportantthingapproachtOcontrolthespreadofSehiztosomiasisjoponico．Aschemicaldrugscausesseriousharmtohumanandenvironmentwhilekillingsnails，moreeffectivedrugsmustbesearchedforovercomingthesedefects．ToexlglOl峙andutilizemoUuscicidalrosollrcefromplantisbecomingan

6、importantfieldinmolluscicidaltask．InourpIimarystudyonmolluscicidaldrugsextractedfixnnplant,theeffectivecomponentfromNeriumindicumshowingsignificantkillingcffec：tagainstOncomelaniahupensis．ToevaluatethemolluseicidaleffectsofNeriumindicumandoffertheoreticsupportto

7、exploitnewmolluscicideandbuildartificialplantcommunitytocontrolschistosomiasis，experimentationsonthemolluscicidaleffectsoftriterpenoidsapeninsfromNeriumindicumtoOncometaniahupensisandtherelationshipbct'wccnstruotllreandeffectsandtheallelopathymechanismWClt'ecarr

8、iedout．Triterpenoidsaponiuswereisolatedfinomtheleaf,stemcoatandrootcoatofNeriumindicumwithsystematicexWaetion,aecorOangtotheirpo／arityJtsseparateproportionis6．16％inav