乳酸杆菌dm9811肽聚糖的分离提取与免疫活性的的研究

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1、S-300HR进行分离和部分纯化。2、肽聚糖鉴定应用苯酚．硫酸法测定总糖含量，对二甲氨基苯甲醛显色联合溶菌酶水解实验测定N．乙酰葡萄糖，测定酶解过程中溶液吸光度的变化情况来鉴定肽聚糖。3、肽聚糖的免疫活性肽聚糖处理小鼠巨噬细胞Ana-1前后，分别1)应用酶联免疫吸附剂测定法(enzymelinkedimmunosorbcntassay。ELISA)检测培养上清中的IL．10，IL．12和TNF．a的蛋白水平；2)在活细胞染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酸亚胺酯(CFSE)标记小鼠巨噬细胞Aria-1后，流式细胞术检测小鼠巨噬细胞Ana-1的增殖分裂；3)流式细胞术检测肽

2、小鼠巨噬细胞Ana-1细胞表面TLR2和TL＆的表达。结果1、应用三氯乙酸和SDS煮沸以及胰酶酶解得到肽聚糖，经苯酚．硫酸法，对二甲氨基苯甲醛显色，溶菌酶水解实验鉴定，凝胶过滤层析显示从乳酸杆菌DM9811获得了分子量相对均一的肽聚糖。2、ELISA结果显示所提取的肽聚糖可以促进小鼠巨噬细胞Ana-1分泌IL．10，IL．12，而低浓度的肽聚糖可以促进TNF．a分泌；流式细胞技术检测结果显示，与对照组相比，肽聚糖处理的巨噬细胞Ana-1分裂代数明显增加，同时细胞表面TLR2和TLR4(主要是TLR4)表达均显著提高。结论乳酸杆菌DM9811肽聚糖提取物表现在体外激

3、活小鼠巨噬细胞Aria一1的免疫活性。关键词：乳酸杆菌肽聚糖提取免疫活性2ThepeptidoglycanfromLactobacillusDM9811：Isolation，ExtractionandImmunologicalActivityMasterDegreecandidate：MingmingZouPh．D．Supervisor：Prof．JianingZhangMajor：BiochemistryandMolecularBiologyAbstractLactobacillusisoneofimportantprobiotics．Thebiological

4、propertiesofpeptidoglycan(PNG)includebiologicalantagonism，nutritionaleffects，immuneregulation,anti-tumorandanti-aging，etc．Lactobacillusplaysimmuneroleviatheinteractionbetweenitsspecificcellularcomponentsandthehostimmunecell．PNGalsocalledmucopeptide，isamajorcellwallcomponentofLactobaci

5、llusandfunctionsitsphysicalandchemicalproperties．ThebasicstructureofPNGconsistsofadisaccharideunitofN-acetyl-D··glucosamineandN-acetylmuramicacid(GlcNAc—MurNAc)by13-1，4linkages．EachGlcNAc—MurNAchasasidechainoftetrapeptide，whichisareinterlinkedbyshortpentapeptideof(Gly)5．PNGisacontinuo

6、uscovalent．．1inkedsac．．1ikedmacromolecularstructurethatisfoundontheoutsideofthecytoplasmicmembraneofalmostallbacteria．Forthepastfewyears，thebiologicalactivityofPNGhasbeenconcemed．TLRs(Tolllikereceptors，TLRs)haverecentlyemergedasakeycomponentofinnateimmunesystemwhichCandetectmicrobiali

7、nfectionandtriggerantimicrobialhostdefenseresponses．TRLsregulatetheacquiredimmunethoughup—regulatingAntigen—presentingcellsurfacecostimulatorymoleculesandantigen-presentingcallstosecretecytokineswhichcouldinducethedifferentiationofTandBlymphocytestotheeffectsofTandBlymphocyte．TLRsCanr

8、ecogn