大蒜果聚糖代谢酶的提取、分离与活性研究

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1、暨南大学硕士学位论文题名（中英对照）：大蒜果聚糖代谢酶的提取、分离与活性研究Extraction,separationandactivityoffructanmetabolismenzymefromgarlic作者姓名：文明指导教师姓名及学位、职称：黄雪松博士教授陈于陇博士副研究员学科、专业名称：工学食品工程学位类型：专业学位论文提交日期：2015.05.03论文答辩日期：2015.06.05本论文由国家自然科学基金（No.31171722，31471595）资助答辩委员会主席：王永华教授论文评阅人：学位授予单位和日期：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在

2、导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制

3、手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编：暨南大学硕士学位论文摘要目的：本文对大蒜果聚糖代谢酶对其分离、纯化以及其生物活性和酶学特征等予以研究。方法：（1）采用不同饱和度的硫酸铵分级沉淀1-SST，以确定其所在的硫酸铵部位。取1-SST活力最高的硫酸铵饱和度部分与底物蔗糖反应，研究其酶学特征。（2）通过改变展开剂的种类和流动相的比例，寻找合适的TLC方法快速检测大蒜果聚糖代谢酶产物低果聚糖。（3）对大蒜粗酶液通过DEAESeph

4、aroseFF阴离子交换层析和Superdex200凝胶过滤层析等方法予以细分，同时利用TLC方法快速检测大蒜果聚糖代谢酶。（4）通过TCA/丙酮法，改进的TCA/丙酮法，酚-甲醇/醋酸铵沉淀法，TCA/丙酮/重蒸酚法等方法对大蒜全蛋白进行了提取，利用双向电泳技术对大蒜蛋白质进行分离。结果与讨论：（1）大蒜1-SST主要存在于30%-40%硫酸铵分级沉淀部分，其最适温度为35℃，最适反应的pH为5.0，最适反应物蔗糖的质量浓度为-14500mg·mL，离子强度越低其活力越强，反应过程中动力学米氏常数Km=10-1-1-1mmol·L，Vmax=2500μg·mL

5、·h，大蒜1-SST随温度、pH、离子强度、底物质量浓度等变化，不仅影响大蒜贮藏过程中的果聚糖代谢，也影响大蒜加工产品，尤其是大蒜提取物中糖的种类和含量。（2）找到了合适的新的TLC方法快速检测低果聚糖，其方法为正丁醇：异丙醇：冰乙酸：水﹦35:25:20:10（展开3次），这样就为大蒜果聚糖代谢酶分离、纯化过程中，快速定性的检测大蒜果聚糖代谢酶提供了合适的方法。（3）通过对大蒜粗酶液予以细分，利用TLC方法快速检测，发现大蒜中还可能还存在6-SFT、1-FFT或6G-FFT，具体哪一种还有待验证。这进一步解I暨南大学硕士学位论文释了大蒜中除了存在1-FEH、1

6、-SST外，还可能存在其他种类的大蒜果聚糖代谢酶。（4）通过几种大蒜蛋白质提取方法比较，TCA/丙酮法/重蒸酚法更适合大蒜全蛋白的提取，这为今后进一步研究大蒜蛋白质组学，提供了方法依据。关键词：大蒜，果聚糖，果聚糖代谢酶，果聚糖:果聚糖1-果糖基转移酶，双向电泳II暨南大学硕士学位论文AbstractObjective:Thisarticleintroducethattheactivityofthemetabolicenzymesofthegarlicisstudiedandtheisolation,purificationandcharacterization

7、oftheenzymearestudied.Methods:(1)1-SSTwasprecipitateswithammoniumsulfateprecipitationtodeterminethepositionof1-SSTindifferentammoniumsulfatesaturation.1-SSTwhichhasthehighestactivityofammoniumsulfateprecipitateandsucroseweretakentoreactionforstudyingitsenzymologicalcharacteristics.(2

8、)TLCrapidlyd