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时间:2019-02-01
《lkb1基因和人乳腺癌细胞生长和侵袭的相关性的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、LKBI基因与人乳腺癌细胞生长和侵袭的相关性研究中文摘要目的:研究LKBI基因对乳腺癌细胞的侵袭和转移影响及其作用机制。方法:筛选LKBl基因转染的MDA-MB-435乳腺癌细胞,随机取样一株高表达细胞株和一株低表达细胞株,同时与未转染细胞株和空质粒转染细胞株比较。RT—PCR和明胶一酶谱法观察基质金属蛋白酶MMP一2、MMP一9和促进微血管生成的因子VEGF、bFGF的基因表达情况,并应用Westernblot对其蛋白定量分析。应用Tramswell试验对其进行膜穿透能力检测。取LKBl基因转染的、空质粒转染的及未转染的MDA-MB-435乳腺癌细胞,分别接种
2、于雌性裸鼠乳晕下,测定移植瘤生长曲线,取其肺转移灶进行组织学观察,并对移植瘤用Western—blot法观察其基质金属蛋白酶和促微血管生成因子的基因表达,并用免疫组织化学法观察其血管密度的表达。同时在38例人乳腺癌手术标本中采用免疫组织化学法观察其LKBl基因与血管密度的表达的关系。结果:在体外实验中LKBI基因转染的乳腺癌细胞的mRNA和蛋白水平上MMP一2、姗P一9和VEGF、bFGF基因表达的相对吸光度值皆较未转染细胞和空质粒细胞为低(p<0.01),且LKBl基因高表达细胞株较低表达细胞株更低。同时发现Tramswell试验中LKBI转染的细胞侵袭能力下
3、降。在体内实验中对照组移植瘤生长迅速,而实验组MDA-MB-435(LKBl)细胞移植瘤生长缓墁。肿瘤体积明显小于对照组(p4、生生长抑制。结果亦显示转染LKBI基因后肿瘤的侵袭、转移相关基因的表达改变,特别是MMP2和删P9及VEGF和bFGF的表达降低,阻断肿瘤细胞内源性侵袭相关因子和血管生成因子的分泌,有效抑制肿瘤生长和血管生成以及降低肿瘤侵袭能力,从而LKBl基因在乳腺癌细胞的侵袭和转移中可能起重要作用关键词:乳腺癌LKBl基因侵袭转移LKBIgeneonthegrowthandinvasionofbreastcancerandtheirmechanismsAbstractObjective=TostudytheeffectofLKBlgeneonthegrowthandinva5、sionofbreastcancercell.Methods:TOscreenoutthecorrespondingpositivecloneofMDA—MB-435/LKBl,setsampleinrandomofthecells,oneisMDA—MB一435/LKBl(H).theotherisMDA—MB一435/LKBl(L)。thentocontrastwithMDA一^忸-435andMDA—MB一435/vec.Matrixmetalloproteinasesandvascularendothelialgrowthfactorsecretionc6、ellularmRNAcontentswereassayedbygelatin—zymographyandRT—PCR,respectively.ProtelncontentsweredetermnedbyWesternBlotanalysis.ThealterationofcellularmigrationpropertywasevaluatedbycellmigrationthroughaMatrlgelmodelbasementmembrane.TheLKBlgeneandtheemptyvectorwereintroducedintothebreastc7、arcinomacellllneMDA-MB一435,respectively,theLKBltransfectedcellsastreatmentandothersascontr01.Thenthesecellsweretransplantedintothebreastofnudemiceandthecellgrowthcurveofthetransplantedtumorswereevaluated.Thepulmonarymetastaticlesionswereharvestedfromthemoribundanimalsandpathologzcalm8、orphologywer
4、生生长抑制。结果亦显示转染LKBI基因后肿瘤的侵袭、转移相关基因的表达改变,特别是MMP2和删P9及VEGF和bFGF的表达降低,阻断肿瘤细胞内源性侵袭相关因子和血管生成因子的分泌,有效抑制肿瘤生长和血管生成以及降低肿瘤侵袭能力,从而LKBl基因在乳腺癌细胞的侵袭和转移中可能起重要作用关键词:乳腺癌LKBl基因侵袭转移LKBIgeneonthegrowthandinvasionofbreastcancerandtheirmechanismsAbstractObjective=TostudytheeffectofLKBlgeneonthegrowthandinva
5、sionofbreastcancercell.Methods:TOscreenoutthecorrespondingpositivecloneofMDA—MB-435/LKBl,setsampleinrandomofthecells,oneisMDA—MB一435/LKBl(H).theotherisMDA—MB一435/LKBl(L)。thentocontrastwithMDA一^忸-435andMDA—MB一435/vec.Matrixmetalloproteinasesandvascularendothelialgrowthfactorsecretionc
6、ellularmRNAcontentswereassayedbygelatin—zymographyandRT—PCR,respectively.ProtelncontentsweredetermnedbyWesternBlotanalysis.ThealterationofcellularmigrationpropertywasevaluatedbycellmigrationthroughaMatrlgelmodelbasementmembrane.TheLKBlgeneandtheemptyvectorwereintroducedintothebreastc
7、arcinomacellllneMDA-MB一435,respectively,theLKBltransfectedcellsastreatmentandothersascontr01.Thenthesecellsweretransplantedintothebreastofnudemiceandthecellgrowthcurveofthetransplantedtumorswereevaluated.Thepulmonarymetastaticlesionswereharvestedfromthemoribundanimalsandpathologzcalm
8、orphologywer
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