lkb1基因和人乳腺癌细胞生长和侵袭的相关性的研究

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1、LKBI基因与人乳腺癌细胞生长和侵袭的相关性研究中文摘要目的：研究LKBI基因对乳腺癌细胞的侵袭和转移影响及其作用机制。方法：筛选LKBl基因转染的MDA-MB-435乳腺癌细胞，随机取样一株高表达细胞株和一株低表达细胞株，同时与未转染细胞株和空质粒转染细胞株比较。RT—PCR和明胶一酶谱法观察基质金属蛋白酶MMP一2、MMP一9和促进微血管生成的因子VEGF、bFGF的基因表达情况，并应用Westernblot对其蛋白定量分析。应用Tramswell试验对其进行膜穿透能力检测。取LKBl基因转染的、空质粒转染的及未转染的MDA-MB-435乳腺癌细胞，分别接种

2、于雌性裸鼠乳晕下，测定移植瘤生长曲线，取其肺转移灶进行组织学观察，并对移植瘤用Western—blot法观察其基质金属蛋白酶和促微血管生成因子的基因表达，并用免疫组织化学法观察其血管密度的表达。同时在38例人乳腺癌手术标本中采用免疫组织化学法观察其LKBl基因与血管密度的表达的关系。结果：在体外实验中LKBI基因转染的乳腺癌细胞的mRNA和蛋白水平上MMP一2、姗P一9和VEGF、bFGF基因表达的相对吸光度值皆较未转染细胞和空质粒细胞为低(p<0．01)，且LKBl基因高表达细胞株较低表达细胞株更低。同时发现Tramswell试验中LKBI转染的细胞侵袭能力下

3、降。在体内实验中对照组移植瘤生长迅速，而实验组MDA-MB-435(LKBl)细胞移植瘤生长缓墁。肿瘤体积明显小于对照组(p

4、生生长抑制。结果亦显示转染LKBI基因后肿瘤的侵袭、转移相关基因的表达改变，特别是MMP2和删P9及VEGF和bFGF的表达降低，阻断肿瘤细胞内源性侵袭相关因子和血管生成因子的分泌，有效抑制肿瘤生长和血管生成以及降低肿瘤侵袭能力，从而LKBl基因在乳腺癌细胞的侵袭和转移中可能起重要作用关键词：乳腺癌LKBl基因侵袭转移LKBIgeneonthegrowthandinvasionofbreastcancerandtheirmechanismsAbstractObjective=TostudytheeffectofLKBlgeneonthegrowthandinva

5、sionofbreastcancercell．Methods：TOscreenoutthecorrespondingpositivecloneofMDA—MB-435／LKBl，setsampleinrandomofthecells，oneisMDA—MB一435／LKBl(H)．theotherisMDA—MB一435／LKBl(L)。thentocontrastwithMDA一^忸-435andMDA—MB一435／vec．Matrixmetalloproteinasesandvascularendothelialgrowthfactorsecretionc

6、ellularmRNAcontentswereassayedbygelatin—zymographyandRT—PCR，respectively．ProtelncontentsweredetermnedbyWesternBlotanalysis．ThealterationofcellularmigrationpropertywasevaluatedbycellmigrationthroughaMatrlgelmodelbasementmembrane．TheLKBlgeneandtheemptyvectorwereintroducedintothebreastc

7、arcinomacellllneMDA-MB一435，respectively，theLKBltransfectedcellsastreatmentandothersascontr01．Thenthesecellsweretransplantedintothebreastofnudemiceandthecellgrowthcurveofthetransplantedtumorswereevaluated．Thepulmonarymetastaticlesionswereharvestedfromthemoribundanimalsandpathologzcalm

8、orphologywer