丁型肝炎病毒内蒙古株重组抗原的表达与抗原性分析

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1、中国疾病预防控制中心硕士学位论文英文缩写英文全称AAgbpBSADNARNAdNTPHDVHDAgHBsAgORFL—HDAgS-HDAgRTPCRELISALBddH：0PAGEPBSSDSTBEEDTAHRPGST主要英文缩写词中文全称absorbance吸光率antigen抗原basepair碱基对bovineserumalbumin牛血清白蛋白deoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸ribonucleicacid核糖核酸deoxyribonucleosidetriphosphat

2、e脱氧核糖核酸三磷酸Hepatitisdeltavirus丁型肝炎病毒HDVantigen丁型肝炎病毒抗原HepatitisBsurfaceantigen乙肝表面抗原openreadingframe开放读码框LargeHDAg丁型肝炎病毒大抗原SmallHDAg丁型肝炎病毒小抗原Reversetranscription逆转录Polymerasechainreaction聚合酶链式反应enzyme-Iinkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附测定luria-bertanimediumL

3、B培养基double—deionizedwater双蒸水polyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳polysphate—bufferedsaline磷酸缓冲盐溶液sodiumdodecylsulfate十二烷基磺酸钠tris，borate，EDTAbufferTBE缓冲液ethylenediaminetetra—aceticacid乙二胺四乙酸horseradishperoxidase辣根过氧化物酶glutathione—s—transferase谷胱甘肽一s

4、一转移酶2中国疾病预防控制中心硕士学位论文TEMEDKBmlmolnm0DUSN，N，N，N-trtramethylethylenediamine四甲基乙二胺kilobasepair千碱基对milliliter毫升mole摩尔，克分子量nanometer纳米opticaldensity光密度unit单位standarddeviation标准差3学位论文原创性、真实性声明本人郑重声明：《丁型肝炎病毒内蒙株抗原的原核表达及抗原性分析》是本人在中国疾病预防控制中心((免疫学》专业吹渎硕士学位期间，在导师指

5、导下完成的硕士学位论文。我承诺：本论文中所涉及的所有数据、试验记录以及研究结果均真实可信，引用资料已注明出处，无剽窃、篡改、抄袭之行为。如本论文原创性方面出现问题，我愿负法律责任。本课题的研究成果归中国疾病预防控制中心所有，发表文章的单位署名为中国疾病预防控制中心。特此声明!学位论文作者(签名)：寺勺炙超干勿炙迢2007年7月r日研究生导师(签名)：2007年’R≤B，中国疾病预防控制中心硕士学位论文丁型肝炎病毒内蒙古株重组抗原的表达及抗原性分析硕士研究生：杨英超导师：毕胜利研究员中国疾病预防控制中

6、心病毒病预防控制所肝炎病毒研究室(北京市宣武区迎新街100号肝炎室，100052)摘要目前，国外厂家生产的丁型肝炎ELISA检测试剂盒已上市销售，效果获得一致认可。例如Abbott公司生产的Murexanti—Delta(total)准确性非常高，其制备过程是从血液中提取HDAg抗原，直接包被聚苯乙烯微孔板制成。国内若干厂家也生产丁型肝炎ELISA检测试剂盒，但未明确说明其使用的HDAg来源。经初步检测，国产试剂盒同Abbott公司产品检测同样血清结果存在差异。同时，国内一些学者在丁型肝炎流行病学调

7、中使用的国产丁型肝炎检测试剂盒得出的结论与先前全国肝炎流行病学调查结果存在一定的差异。从内蒙某丁肝患者血清中提取丁肝病毒，经RT—PCR与PCR，使用PET43a表达质粒及HDVL-Ag5’和37端引入His标签获得丁型肝炎病毒L一旭重组表达质粒，转化BL21(Rosetta)宿主菌，IPTG诱导表达。表达产物经饱和硫酸胺盐析与亲和层析柱纯化后，采用EIA竞争法分析其抗原性。本研究获得了表达量高、抗原性强的基因工程重组抗原；同时检测了不同地区的丁肝患者血清，初步验证其抗原性及在检测不同地区丁肝血清方

8、面的差异及与Abbott公Murexanti—Delta(total)试剂盒检测方面的差异。结果表明经与ABBOTTMurexanti—Delta(total)试剂盒同步检测15份阳性和lO份阴性血清，一致率100％。EIA检测，证明具有良好的抗原性，基因工程表达的抗原蛋白在检测不同地区丁肝血清方面未见差异，故可用于丁肝的诊断及相关研究。【主题词】6肝炎病毒；抗原，病毒；基因4中国疾病预防控制中心硕士学位论文前言1977年从一些慢性感染HBV的意大利患者中发现了丁型肝