蛋白芯片技术对吸毒人群hcv感染状况的研究

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1、中山大学博士学位论文中文摘要蛋白芯片技术对吸毒人群HCV感染状况的研究专业：内科学传染病学博士生：舒欣指导老师：姚集鲁教授中山大学附属第三医院感染病学科中文摘要丙型病毒性肝炎是病毒性肝炎中一种重要的类型，在我国约3．2％的人口受到丙型肝炎病毒(hepatitisvirusC，HCV)感染，西方发达国家的感染率也高达0．5％到2％，全球感染率约3％(1．7亿)。感染HCV后50％到85％的患者会慢性化，大多数表现为慢性肝炎，估计约15--20％可进一步发展为肝硬化，甚至肝细胞癌，其危害性大。目前检测丙肝病毒的方法有两类：一是检测HCV抗体，二是检测HCVRNA。由于检

2、测RNA的实验室条件要求比较高，操作复杂，易产生假阳性反应，并且价格昂贵、对实验人员要求高等原因，限制了其在临床上的广泛应用。现在普遍使用的仍为检测HCV抗体的方法，其中以检测血清中HCV抗体的ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)法较为普遍，ELISA法主要的特点是操作简便，检测快速，但仍有不足之处，在感染后窗1：2期内不能测出，在低危人群中仍发现大量的不确定及假阳性结果。蛋白质芯片是伴随着基因芯片发展起来的一项新技术，已开始应用于多中山大学博士学位论文中文摘要个方面，如蛋白质与蛋白质的相互作用，蛋白质的亚细胞定位

3、，蛋白质的功能等蛋白质芯片已成功地应用于多种细胞因子、自身免疫性疾病、及过敏原等的检测。近年来也有学者开始应用蛋白芯片进行病原微生物的检测。丙型肝炎主要通过输血、不洁注射等血液传播以及体液传播。近年来，随着对丙型肝炎病毒抗体和核酸检测的开展和普及以及加强对血源和输血的严格管理，输血后丙型肝炎已经大幅度减少，静脉吸毒等不洁注射行为已经成为目前我国丙型病毒性肝炎最主要的传播途径。在静脉吸毒人群(Intravenousdrugusers，IVDUs)中有较高的HCV感染率，国外报道在IVDUs中HCV感染率为30一95％。目前静脉吸毒人群中HCV感染者的研究主要集中在感染

4、率、危险因素、吸毒时间等方面，而在不同的注射方式的静脉吸毒者中其血清HCVRNA随吸毒时间的变化未见有报道。本课题对静脉吸毒人员及门诊非静脉吸毒人员感染HCV者进行研究，应用丙肝病毒分片段蛋白质芯片、ELISA及荧光定量RTPCR三种不同方法检测静脉吸毒人员中HCV的抗体及RNA状况，并与非静脉吸毒HCV感染者进行比较，探讨三种检测方法检测HCV的差异及蛋白芯片技术的临床应用价值，注射方式对HCVRNA的影响以及静脉吸毒及非吸毒两种人群HCV感染者中HCV病原学差异。材料和方法1研究对象：2005年1月在广东省某强制戒毒所的静脉吸毒人员89例，其中男性82例，女性7

5、例，平均年龄30岁(20岁--47岁)，使用毒品期限平均2年(10天～12年)。非吸毒HCV感染者为在我院就诊的患者35例，其中男性29例，女性6例，平均年龄44岁(29岁～66岁)，均有输血、血浆史，无吸毒史。2标本采集与保存：静脉吸毒人员及非吸毒HCV感染者于清晨采空腹静脉血n中山大学博十学位论文中文摘要5ml，及时分离血清，70。C低温冷冻保存待检。3丙型肝炎病毒抗体的检测：采用中山生物工程公司的丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒(包括C区及NS3、NS4和NS5抗原)，使用ELISA方法检测，操作按说明书进行。4血清HCV—RNA定量的检测：采用中山大学达安基因公司

6、荧光定量PCR检测试剂盒，操作按说明书进行。5丙肝病毒分片段蛋白质芯片的检测：采用深圳益生堂公司的丙型肝炎分片段抗体检测蛋白芯片试剂盒，操作按说明书进行。结果判断：核心、NS3、NS4、NS5任一片段阳性，则检测结果不能确定，为可疑阳性，两个或两个以上片段抗体阳性，则检测结果为阳性。6统计分析：采用SPSSll．0统计软件进行统计分析，率的比较使用x2检验，均数比较使用t检验。结果1三种不同检测方法的检测结果：显示在总共124份血清中，ELISA检测HCV抗体阳性114例，RT-PCR检测HCVRNA阳性76例，而应用丙肝病毒分片段抗体检测蛋白质芯片检测阳性110例

7、，阴性9例；不确定5例。(抗一C阳性2例，抗一Ns3阳性2例，抗一NS4阳性1例)。2蛋白芯片与HCVRNA检测结果比较76份HCVRNA阳性血清中，蛋白芯片检测阳性74份，阴性1份，不确定1份。在48份HCVRNA阴性的血清中蛋白芯片检测阳性36份，阴性8份，不确定中山人学博士学位论文中文摘要4份。蛋白芯片与RT—PCR相比阳性符合率为97．37％o。在蛋白芯片检测阴性的9份血清中，HCVRNA阳性1份，符合率为88．89％，在5份蛋白芯片检测结果不能确定的血清中，HCVRNA阳性l份。检测结果中以抗--C+抗一NS3+抗一NS4+抗一NS5阳性组合的比例最高