肝动脉化疗栓塞联合动脉内灌注促肝细胞生长素对兔vx2肝癌模型的疗效研究

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1、226～√∞<0．05)．Conclusion：TACEcombinedwithintrahepaticarteryinfusionofpHGFonthetreatmentofrabbitVX2hepaticcarcinomacanimprovetheliverdysfunctionafterTACE．Howeever，italsopromotesthestump—tumoran—giogenesisandthetumorgrowththanTACEalone．【Keywords】Hepatocytegrowthfacto

2、r；RabbitVX2livercancer；Hepatocellularcarcinoma；Chemoem—bolization；Microvesseldensity对于不能手术切除的原发性肝癌(hepatoeellularcarcinoma，HCC)，经导管肝动脉化疗栓塞术(tran—scatheterarterialchemoembolization，TACE)是目前公认的首选的非手术方法。但其总体疗效并不乐观，其3年生存率只有14％一30％t11，主要因为很多原发性肝癌患者经TACE治疗后死亡原因不在于肝内肿瘤而往

3、往死于肝功能衰竭，特别是原有肝炎或肝硬化基础上并发的肝癌。国内外文献报道TACE后急性肝衰竭并发症约0．26％一13．4％f：-31。如何避免TACE术后出现急性肝功能严重损害甚至肝功能衰减，同时又能保证患者安全接受化疗栓塞是目前临床研究重点。肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor，HGF)是目前研究的生物学活性最广泛的生长因子，它具有多种生物学作用，但其对肝癌细胞的影响目前还存在争议。本实验通过促肝细胞生长素联合TACE对兔VX2肝癌的肝功能，肿瘤体积及MVD值，从而对其疗效进行评估。1材料与方法1

4、．1材料：30只新西兰大白兔，体量2200±lOOg，雌雄不拘，由苏州大学医学院实验动物中心提供。荷瘤种兔由浙江省中医药大学影像科惠赠。促肝细胞生长素由哈尔滨医大药业有限公司提供，抗CD34抗体够自武汉博士德生物工程有限公司，抗兔，鼠通用型免疫组化检测试剂盒由上海基因技术公司提供1．2方法：1．2．1实验动物模型分组及治疗方法：VX2肝癌的模型建立及介入治疗方法参照文献14I进行，将30只VX2肝癌模型荷瘤兔随机分为A，B，c三组，每组10只。A组(n=10)单纯肝动脉化疗栓塞组：超液态碘化油0．2ml／kg+顺铂lmg／

5、l(g反复乳化后，透视下经导管缓慢注人；B组(n=10)肝动脉化疗栓塞+局部肝动脉促肝细胞生长素灌注组：TACE方法同A组，同时在局部肝动脉内灌注pHGF0．Img／kg；C组(n=lO)假手术组，经肝动脉造影并灌注生理盐水2ml。术后三组动物均每天予以庆大霉素8万单位肌注，连续三天。(附图1)术后28天后处死所有动物，取出肿瘤标本观察，并把取出的肿瘤标本用10％福尔马林固定，选取肿瘤周边生长最旺盛的部分进行石蜡包埋，制成厚度为3um的切片，行HE染色及免疫组化(MVD)染色。1．2．2肝功能检查：介入治疗前1天及治疗后第

6、3,7和28天分别抽血检测血清的丙氨酸氨基转移酶(ALT)。1．2．3肿瘤的生长情况：术前ld在B超下测量肿瘤的最大直径(a，)和最小直径(b。)，按V=-／加珥s计算治疗前体积(v。)。术后第28天，再次行B超检查，测量肿瘤的最大径与最小径，计算肿瘤增长率，观察肿瘤体积变化情况。1．2．4HE染色与免疫组化：术后28天后处死所有动物，取出肿瘤标本观察，并把取出的肿瘤标本用10％福尔马林固定，选取肿瘤周边生长最旺盛的部分进行石蜡包埋，制成厚度为3um的切片，行HE染¨o-l¨田际肝胆胰外科昆山论坛论文汇编色及免疫组化(MV

7、D)染色。①对照染色：免疫组化染色设阳性对照，以已知乳腺癌阳性标本作为阳性对照：阴性对照，以PBS液代替一抗作为阴性对照。②MVD计数：CD34因子染色阳性血管内皮细胞胞浆呈棕黄色；采用SupervisionTM二步法，DAB／I-120：显色，先以40倍低倍镜下选择瘤灶内及瘤巢周围微血管最密集的5个区域，每个独立的染成棕黄色的血管内皮细胞(或细胞簇)以及不相连的微血管腔，均作为一血管参与计数，但需排除较大的有平滑肌细胞包绕的血管。然后分别在200倍光学显微镜下计数每个区域中的血管数，取5个区域的平均值作为该兔VX2肿瘤的

8、MVD，并行组间对比。(附图2—3)1．2．5统计学方法：应用SPSS13．0统计软件。对3组动物肿瘤体积、肿瘤体积增长率、MVD和TACE前后肝功能变化采用方差分析，再崩LSD法进行组间两两比较，p