心外膜ace2基因涂染对快速心房起搏犬ras系统的影响

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1、重庆医科大学硕士研究生学位论文于房颤维持的“基质”。因此AngII是房颤发生、发展的主要病理因素之一。而目前的临床研究结果也证实了阻断AngII所带来的心脏“获益”。作用于AngII的阻断剂即RAS抑制剂主要包括：血管紧张素转化酶抑制剂(ACEIs)和血管紧张素酶受体拮抗剂(灿沿s)。目前多项大型多中心临床研究如SOL旧【61、CH删【71、uFE【8】白勺回顾性分析发现，对于各种原因引起的器质性心脏病患者，使用RAS抑制剂治疗后，病理情况及症状出现改善，并在一定程度上预防了房颤的发生或延缓了房颤的进展。

2、本课题组进行的一项关于氯沙坦(m出)或培多普利(ACEI)联合小剂量胺碘酮与单用胺碘酮治疗孤立性房颤及预防复发的研究发现‘9‘101，联用RAS抑制剂较单用胺碘酮分别减少了40％．50％的房颤复发率。以上临床实验结果证明了＆蟠抑制剂通过减少AngII的量或者阻断其作用途径，可以达到改善心肌病理，减少房颤发生、进展及复发的作用。随着血管紧张素转化酶2(angiotenSinconvertingenzyme2，ACE2)被发现【11】，AngII的代谢调节方式又出现了新的路径，也为房颤发生的预防提供了全新的研

3、究靶点。ACE2蛋白由805个氨基酸组成，是单一胞外催化域的I型跨膜糖蛋白。其活性结构具有两个同源区域：氨基端催化域和羧基端催化域，每个结构域都有同样的活性中心即锌金属肽酶结构域，该活性区域的氨基酸序列与ACE的氨基酸结构域具有41．8％的序列相似性‘1’】。ACE2作为一种跨膜功能蛋白，全身重要器官均有分布。Samos，RA．等【l3】最初发现ACE2转录子仅仅分布在心脏、肾脏、睾丸血管动静脉的内皮细胞，而心肌细胞及肾小管内皮细胞也有分布，但蛋白密度的分布并没有显著差别。而随着研究的不断深入【14】，发

4、现ACE2还分布在肺组织的I、II型上皮细胞、上呼吸道内皮细胞、皮肤基底细胞及胃、小肠的内皮细胞和平滑肌细胞及卵巢组织等。ACE2在全身的广泛分布也预示着其功能分布的广泛性，因此我们可以推测其在生理状态维持及病理变化的发生过程中都发挥着重要作用。ACE2自身并不会对组织产生作用，而是通过水解AngII为Ang(1—7)，一方面降低组织的AngII水平和活性，另一方面生成的Ang(1．7)可以特异性的激活Mas受体，从而发挥抗纤维化、抗增殖、扩血管、抗凋亡等作用。在ACE2水解AngII生成Ang(1．7)

5、的过程中，ACE、Ang(1—9)等都参与其中。目前房颤的治疗方法主要集中在抗心律失常药物及导管消融治疗，但抗心律7重庆医科大学硕士研究生学位论文失常药物致力于恢复和延长房颤时缩短的有效不应期和／或动作电位时程，导管消融侧重于局部去除心房或肺静脉前庭内的异位兴奋灶。显而易见，无论抗心律失常药物治疗还是导管消融治疗都有明显的局限性，都不够重视改善心房结构重构。研究表明，以心房肌肥大、凋亡、间质纤维化为基本特征的心房结构重构严重影响心房肌的传导特性，并损害心肌复极的同步性，有利于折返的形成而成为房颤发生与维持

6、的解剖学机制【151。而随着目前基因治疗方法学研究逐的渐深入，过表达ACE2基因以观察ACE2对房颤犬RAS系统的影响成为可能。本课题组使用基因涂染的方法【16】即将携带目的基因的腺病毒溶液、P010)(amerF407与适量的胰蛋白酶混合后均匀涂染于心房外膜，由于心房壁的厚度仅3．5mm，完全可使基因全层转染。其中，PoloxamerF407具有独特的物理学特性(4℃时为液态，体温37。C时为凝胶状)可将目的基因局限在目标部位，实现基因的靶向转染。此外，在上述溶液中加入胰蛋白酶可进一步增加基因转染率。因

7、此，我们认为心房外膜基因涂染是一种可靠的、有效的基因转染方法。基于以上理论，本课题假设如果可以经心房组织涂染过表达ACE2，也许可以通过降解AngII产生Ang(1．7)，从而降低心房组织RAS系统的活性水平，改善房颤发生及维持的“基质”，或许可以逆转心房重构，从而预防或者治疗房颤。ACE2作为RAS系统的重要组成部分，将对今后研究拮抗RAS的病理作用有着重要的意义。就目前的研究结果，ACE2在高血压、心肌梗塞、动脉动脉粥样硬化、心脏衰竭等的保护作用已经引起重视并取得了一定的试验证据，但在心房颤动的研究中

8、却很少见到相关报道，因此深入研究ACE2的作用机制将对进一步了解房颤机制及治疗提供新的认识，并且有可能为房颤的治疗提供新的治疗靶点。8重庆医科大学硕士研究生学位论文第一部分：经犬心外膜涂布实现外源基因在心房肌(细胞)的高效转染近年来室性心律失常的基因治疗技术取得了初步进展，但组织转染的靶向性缺乏、治疗效果的局限以及可能引发的炎症反应都限制了基因转染技术的广泛应用，而能否靶向高效转染目的组织是所有基因转染方法的基础。目前文献报道