人abca1基因变异检测及其与脑梗死关系的研究

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1、福建医科大学博士学位论文人ABCA1基因变异检测及其与脑梗死关系的研究姓名：薛偕华申请学位级别：博士专业：神经病学指导教师：王柠;吴志英20090301福建医科大学博士论文摘要人ABCAI基因变异检测及其与脑梗死的相关性的研究摘要背景和目的近几十年来，随着人类生活水平的提高，动脉硬化成为人类死亡的主要原因。在动脉硬化发病机制研究中，不断发现一些与动脉硬化相关的基因，三磷酸腺苷结合盒转运体hl(ABCAl)是其中主要的一种。ABCAI基因位于9q31，长度149kb，含有50个外显子和49个内含子，编码2261个氨基酸组成的

2、完整跨膜蛋白，分子量为250kD。ABCAl以ATP为能源，促进细胞内游离胆固醇和磷脂的流出，结合到细胞表面的apoAl，形成新生的高密度脂蛋白(HDLC)，并启动胆固醇逆转运过程。ABCAI基因突变导致Tangier病(TD)和家族性低Q脂蛋白血症(FHA)，临床表现为严重的HDL、apoM低下，早发动脉粥样硬化，伴有肝脾肿大和外周神经病变等。目前国外报道ABCAl基因有81个突变位点，包括54个错义突变，3个剪接突变，20个插入或缺失突变，4个其他类型突变(http：／／www．hgmd．org)，这些突变位点可导致脂

3、质流出障碍，促进动脉硬化的发展。ABCAI基因编码区和非编码区含有大量的SNP位点，研究表明这些SNP位点与血浆脂质水平以及动脉硬化程度有密切的相关性。目前关于ABCAl基因变异在中国汉族人群中研究较罕见，大多是单核甘酸多态性SNP的易感性研究，尚未见中国人群ABCAl基因突变的研究。另一方面ABCAI基因SNP研究主要集中在心血管疾病方面，与脑梗死易感性研究较少见，尤其是多个SNP位点与脑梗死的研究则更罕见。本研究目的在于探讨ABCAI基因在中国汉族人群中的变异分布情况及其SNP与脑梗死的易感性研究；同时对于可疑突变位点

4、进行突变体的功能研究。方法1采用PCR—RFLP、变性聚丙烯酰胺电泳技术及DNA序列测定技术，对72例HDL

5、2例，对ABCAI基因1051G-·A(Ar9219Lys)和2826G--"A(Val82511e)多态进行检测，比较不同基因型与个体血脂水平及其与脑梗死的易感性的相关性；比较不同基因型间的协同相互作用。3构建ABCAI-EGFP真核表达质粒的野生型和突变体，进行转染293T细胞，以免疫荧光共聚焦显微镜观察野生型和突变体细胞的ABCAI蛋白的表达情况(形态学变化)；另一方面转染293T细胞24小时后，加入含Dehydroergosterol(DHE)细胞培养基，利用高效液相色谱技术(HPLc)检测野生型和突变体细胞对DH

6、E转运的能力。结果中国汉族人群中存在国外已经报道的7号外显子R219K和17外显子V825I两个SNP位点；在动脉粥样硬化性脑梗塞(ACI)组R219K基因型频率和等位基因频率与对照组比较差异有显著性(x2=9．89，P<0．Ol；x2=9．16，尺O．005)；在年龄大于60岁亚组，ACI组与对照组比较，KK基因型频率和K等位基因频率差异有显著性(x2=13．91，尺0．005；x2=11．46，只0．005)；在男性亚组，ACI组与对照组比较，KK基因型频率和K等位基因频率差异有显著性(x2=13．24，尺O．005；

7、x2=8．60，尺0．005)；携带KK基因型的个体较RR携带者罹患动脉粥样硬化性脑梗塞的风险显著减少(OR：0．30，95％CI：0．14--一0．66，P=0．002)；在高血压患者中，相对于KK基因型，RK和RR基因型者罹患ACI的风险增力日(0R：3．09，95％CI：1．54—6．19，尸=0．002：OR：4．81，95％CI：1．94—11．94，尸=0．001)；类似的结果亦可见于VI和W相对于II基因型；相对于KK和II携带者，RR和yI携带者罹患ACI的分险明显增加(0R：2．69，9596CI：1．3

8、9—5．22，P=0．003)。V825I位点与动脉粥样硬化性脑梗塞则无明显关系。相对于RR型，RK、KK基因型血清ApoAl水平呈逐渐增加趋势(P=-O．04；P=-O．03)；在女性患者中相对RR型者，携带K等位基因者血清ApoAl和HDL-C水平更高(尸=0．01)。V8251位点则与血脂水平无明