兔着床后全胚胎培养方法和三种纳米材料小鼠体外发育毒性的分析

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1、第二军医大学硕士学位论文胚胎培养方法是成功的。二、三种纳米材料对体外小鼠胚胎生长发育的影响取GD8．5的ICR小鼠胚胎，采用小鼠WEC方法，分别用60nm二氧化钛、60rim聚苯乙烯以及不规则形状的单壁碳纳米管在64．0j160．0、400．0}tg／mL剂量下培养48h后收获胚胎，解剖镜下观察监测终点，采用Van小鼠胚胎发育评分法对小鼠胚胎进行评分，研究其对小鼠体外胚胎的生长发育影响。1．纳米二氧化钛(Nano．Ti02)Nano—Ti02在受试浓度下，卵黄囊直径、胚胎颅臀长、头长三项生长指标和体节数与对照组间没有明显差异，但畸形率与对照组相比差异有统计学意义(P

2、<0．05)，而且随着剂量增加畸形率升高，有明显的剂量．反应趋势。在64．0I_tg／mL浓度开始就观察到胚胎出现发育毒性表现，卵黄囊血循环、体位、心脏、尾神经管、中脑、后肢的评分低于对照组(P

3、0．0、400．0I．tg／mL三种浓度下对小鼠胚胎各生长指标情况没有出现明显的影响；畸形率有增加但与对照组比较差异无统计学意义；各剂量组形态学分化评分均低于对照组但没有统计学差异，主要影响心脏、脑、听觉器官及后肢。3．单壁碳纳米管(SWCNTs)单壁碳纳米管在“．0、160．0、400．099／mL受试剂量下，中剂量组严重影响小鼠胚胎体节发育，形态学分化评分也明显降低，畸形发生明显高于其他剂量组，多个器官出现畸形。出现的发育毒性主要表现为：卵黄囊循环血管发育较差、体位翻转不全、体节紊乱、心包积液或发育不良、听觉视觉鳃弓发育不良、后肢芽缺失。低剂量和高剂量组的生长发

4、育指标和组织器官形态分化指标与对照组没有统计学差异。4．三种纳米材料对小鼠发育毒性的比较Nano-Ti02在64．0rtg／mL浓度开始就观察到胚胎出现发育毒性；单壁碳纳米管在160．0Itg／mL剂量下出现胚胎发育毒性；而Nano．PS在受试剂量下能明显影响少数器官。从致畸性来说，Nano-Ti02在64．0I_tg／mL浓度就开始与对照组有统计学差异，并有明显的剂量．反应趋势；单壁碳纳米管仅在160．0I-tg／mL剂量组与对照组有统计学差异，无明显剂量．反应趋势，但致畸发生率和致畸严重程度均比Nano-Ti02高。从致·2．兔着床后全胚胎培养方法和三种纳米材料

5、对小鼠体外发育毒性的研究畸类型来说，Nano．Ti02明显影响卵黄囊循环，主要引起中脑、心脏、视觉、嗅觉器官和尾神经管畸形，60nmPS主要影响心脏、脑、听觉器官及后肢，SWCNTs能引起几乎所有的器官畸形，包括脑部、心脏、面部器官、尾神经管等。三、纳米二氧化钛对小鼠和兔体外胚胎发育毒性的比较"Nano．Ti02在!‘60．O：400．0、1000．01xg／mL剂量下对兔胚胎头长、体节数的生长发育情况没有出现明显的影响，160．0、400．0I-tg／mL剂量畸形率与对照组有统计学差异，无明显剂量一反应关系趋势：各组的形态学评分均低于对照组，但均无统计学差异。而小

6、鼠各剂量组畸形率与对照组相比差异均有统计学意义(P<0．05)；从致畸类型和受影响的组织器官兔和小鼠相近，但小鼠受影响的组织器官更多。通过研究，主要获得以下成果：结论：’(1)在国内首先成功引进建立了兔着床后全胚胎培养方法。(2)三类纳米材料均不影响小鼠胚胎存活，对胚胎生长指标没有明显影响，但Nano．Ti02在64．01ag／mL浓度就可引起体外小鼠胚胎致畸等发育毒性，并有明显的剂量．反应趋势；SWNCT在160．099／mL剂量可引起胚胎发育毒性，无明显剂量．反应趋势，但致畸发生率和致畸严重程度均匕l',Nano．Ti02高：而Nano．PS在受试剂量下仅对形态

7、分化有一定迟缓作用，其发育毒性有待进一步验证。(3)Nano．Ti02在受试剂量下均可引起兔和小鼠体外胚胎致畸等发育毒性，毒作用特点相近，但从发生率和引起毒性的剂量及严重性上小鼠比兔似更敏感。关键词。兔，小鼠，着床后全胚胎培养，纳米材料，胚胎-3．第二军医大学硕士学位论文Abstract111eresearchofrodentwholeemb巧ocultureanditsapplicationfordevelopmentaltoxicityhadbeenformorethan30years．NowithadbeenimprovedbyECVAMforitscon