补肾方药有效成分配伍对体外培养大鼠成骨细胞生物学活性实验性比较的研究

《补肾方药有效成分配伍对体外培养大鼠成骨细胞生物学活性实验性比较的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中文摘要补肾方药有效成分配伍对体外培养大鼠成骨细胞的生物学活性的实验性比较研究摘要目的：骨质疏松症(Osteoporosis，OP)是一种全身性代谢性骨病，是目前世界上发病率、死亡率及保健费用消耗较大的疾病之一。据统计全世界目前约有2亿人患有骨质疏松。骨质疏松症发病常“静悄悄”，“不知不觉’’，一旦发现多已经发展到一定程度，因此越来越引起人们的重视。从细胞学水平上来研究骨质疏松的发病机理及其药效评价已经成为基础与临床研究的热点。成骨细胞和破骨细胞之间的动态平衡在维持骨的正常结构和代谢中具有重要作用。骨质疏松

2、是由于骨吸收和骨形成解偶联，骨吸收大于骨形成导致骨量丢失而引起。大量资料显示：成骨细胞的增殖抑制、分化程度降低是造成骨质疏松的重要原因。中医药学(TCM)认为骨与肾的关系密切，其在预防和治疗骨质疏松及骨折方面存在着悠久的历史。祖国医学古典医籍《黄帝内经》中，有很多类似于骨质疏松的名称的记载，历代也有不少治疗骨质硫松的名方。本实验中补肾方药由熟地黄、淫羊藿、山药、丹参、骨碎补、独活组成。有效部位的单体化合物依次是梓醇、淫羊藿苷、薯蓣皂苷元、丹参酮IIA、柚皮苷、羟甲香豆素。细胞培养技术(Cellculture

3、technique)，是生命科学研究中一个必不可少的技术。我们多次酶消化．贴块法对SD大鼠原代成骨细胞的体外培养，而获得足够数量的成骨细胞。首中文摘要先观察成骨细胞在生长过程中的形态学变化，进而以体外培养的SD大鼠成骨细胞5～6代为实验对象，采用补肾方药不同单体配伍、生药配伍、淫羊藿苷单体进行成骨细胞干预性培养，在不同浓度、不同时间及不同配伍的情况下，采用噻唑蓝法(MTT)和对硝基苯二钠基质动力学法(pNPP)分别对大鼠成骨细胞的增殖与分化进行测定。通过比较和观察补肾方药不同配伍对成骨细胞的增殖和分化的影响

4、，从而初步确定补肾方药及其组分配伍有效性及其有效浓度范围。方法：1、我们选用新生(<24h)SD大鼠颅盖骨为试验材料，采用多次酶消化．贴块法对大鼠原代成骨细胞的体外培养。倒置显微镜下对原代成骨细胞形态学变化进行观察；2、补肾方药的配伍分组：依据中医基础理论和方剂学配伍规律将补肾方药中“地黄+淫羊藿+山药”和“骨碎补+丹参+独活”各分为一类，即：“补药”(TonicsMedicine，TMed)和“泻药”(CatharticMedicine，CMed)。“补药”(TMed)和“泻药”(CMed)分为生药(Cr

5、udeDrug)(原药直接提取的成分)和单体(monomer)(有效化学成分)两种，称为“补药生药配伍组(crudeTonicsHerbsCompatibilityGroups，cTHCG)"和“泻药生药配伍组(crudeCatharticHerbsCompatibilityGroups，cCDCG)”，分别用“CT’’组和“CC"组表示；“补药单体配伍组(monomerTonicsDrugCompatibilityGroup，mTDCG)”和“泻药单体配伍组(monomerCatharticDrugCom

6、patibilityGroup，mCDCG)”分别用“MT”和“MC”表示。补肾方药的试验分组：分8组，(L)CT>CC组，②CT=CC组，⑧CTMC．组，⑥MT=MC组，⑦MT“泻药"(CMed)：地黄：淫羊藿：山药：骨碎补：丹参：独活(2：2：2：1：1：1)；“补药”(TMed)=“泻药”(CMed)：地黄：淫羊藿：

7、山药：骨碎补：丹参：独活(1：l：1：1：l：1)；“补药”(TMed)<“泻药”(CMed)：地黄：淫羊藿．O山药：骨碎补：丹参：独活(1：1：l：2：2：2)；4、用噻唑蓝比色法(MTT)法测成骨细胞的增殖；加入浓度各为10ng／ml、20ng／rra、30ng／ml的补肾方药及中药单体；继续培养24h、28h、72h后，加入MTT20ul，用酶标仪测定OD值，观察对大鼠成骨细胞增殖的影响。5、用对硝基苯二钠基质动力学法(pNPP)测定大鼠成骨细胞的分化；换上补肾方药及中药单体，加药浓度各为10ng／m

8、l、20ng／ml、30ng／ml后；继续培养24h、28h、72h后，吸弃培养液，加入0．25ml0．1％Triton溶液，按试剂盒说明测定，结果以每克蛋白中碱性磷酸酶(ALP)的国际单位(U／gprotein)表示，该方法通过对ALP含量的测定，进而可反映．OB的分化情况。结果：l、多次酶消化．贴块法大鼠原代成骨细胞的体外培养的形态学观察1．1倒置显微镜下观察发现，原代成骨细胞由大鼠颅盖骨周爬出，贴壁、展开，