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《补肾中药对增龄大鼠成骨细胞Cbfα1表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、补肾中药对增龄大鼠成骨细胞Cbfα1表达的影响作者：王巍巍,魏义勇,石印玉【摘要】目的观察核心结合因子α1(Cbfα1)在增龄成骨细胞中的表达,探讨补肾中药促进骨形成的新机制。方法来源于不同年龄的大鼠成骨细胞被分离,采用组织块翻转方法培养。通过倒置显微镜观察细胞形态,矿化结节染色对成骨细胞加以鉴定。采用RT-PCR和免疫组化方法检测成骨细胞Cbfα1的表达。结果RT-PCR和免疫组化结果表明,在增龄成骨细胞中,固本壮骨胶囊、金匮肾气丸和西药萌格旺可上调不同龄大鼠成骨细胞Cbfα1的表达,知柏地黄丸则下调Cbfα1的表达,补肾益精方对于不同龄大鼠成骨细胞Cbfα1表达的影响存在着区别。结
2、论补肾中药中的补阳中药具有促进骨形成的作用。【关键词】补肾中药；核心结合因子α1；成骨细胞；大鼠 Abstract：ObjectiveToobservetheexpressionofcore-bindingfactorα1(Cbfα1)inagingosteoblast,andtrytoprovidenewmechanismsofChinesemedicineonboneformation.MethodsRatosteoblastfromdifferentagedonors(6monthsand16months)wereisolatedandculturedbythetissue
3、-fragment-migrating-growthmethod.Thebiologicalcharacteristicwas10observedbyphase-contrastmicroscopeandidentifiedwithmineralizingnodulestaining.TheexpressionofCbfα1wasexaminedbyRT-PCRandimmunohistochemistry.ResultsRT-PCRandimmunohistochemistryshowedthattheexpressionofCbfα1wasupregulatedbyGubenzhu
4、angguandJinkuishenqi,anddownregulatedbyZhibaidihuanginagingosteoblast,buttheeffectwasdifferentontheCbfα1expressioninBushenyijing.ConclusionBuyangChinesemedicineamongBushenChinesemedicinepromotedboneformation. Keywords：BushenChinesemedicine；core-bindingfactorα1；osteoblast；rat一般认为,骨代谢是维持骨组织不断更新、保
5、持生命活力的基本过程,这一过程是依靠骨重建(boneremodeling)完成的。骨质疏松症骨丢失的潜在机理是骨重建过程的失调。目前的研究已证实核心结合因子α1(Cbfα1)是促进骨形成的关键因子。本实验以增龄大鼠成骨细胞为研究对象,探讨补肾中药对增龄成骨细胞Cbfα1的影响,以进一步提高补肾中药对骨质疏松症防治的有效性[1]。 1实验材料10 1.1动物 正常6月龄及16月龄SD大鼠各2只,上海中医药大学实验动物中心提供。适应性饲养3d后,提取骨组织以培养原代成骨细胞。正常6月龄SD大鼠70只,体重为(270±20)g,雌雄各半,上海中医药大学实验动物中心提供。适应性饲养3d后
6、,随机分为7组：正常组、生理盐水组、单味补阳组、复方补阳组、复方平补组、复方补阴组和西药对照组。灌胃后制备含药血清。 .2药物、试剂和仪器 知柏地黄丸,兰州佛慈药厂生产,批号019804；补肾益精方,上海中医药大学附属曙光医院制剂室生产,批号010521；固本壮骨胶囊,浙江迪耳药业有限公司生产,批号021012；金匮肾气丸,兰州佛慈药厂生产,批号019604；萌格旺,日本帝人株氏会社生产,批号5699。所有药物用前均以蒸馏水配制成混悬液。 DMEM/HamF12(美国Gibco公司)；胰蛋白酶(Promega,1∶250)；新生小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；青霉素、
7、链霉素(上海第二制药厂)；Trizol(Invitrogen)；RNA逆转录试剂盒(Biotech)；抗Cbfα1抗体及二抗(Santa10Cruz)；SABC免疫组化试剂盒(武汉博士德公司)。紫外分光光度计(Beckman,德国)；H6-1微型电泳槽(上海精益有机玻璃制品仪器厂)；PCR扩增仪(MJResearch)；紫外成像分析系统(上海天能科技有限公司)；TanonGIS凝胶图像处理系统3.70版(上海天能科技有限公司)。 2实验方法
