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1、复方补肾中药对去卵巢大鼠骨质疏松作用的影响论文.freelyratsandstudyitsmechanism.MethodsAdultovariectomizedratsodelofpostmenopausalosteoporosis.Afterbeingfedodel,thegeneralBMDintreatedgroupsincreasedsignificantly(P0.01)izedratsfemaleratsosteoporosisinducedbyovariectomy.Oneofthemechanismsenopausal；IL-1；IL-6；
2、TNF-α；animalmodel；drugofkidneyinvigoration绝经后骨质疏松症(PMOP)是由雌激素减少所致的骨质疏松,随着细胞生物学和分子生物学研究的不断深入,骨髓微环境中细胞因子的作用越来越受到人们的重视。为进一步探讨补肾中药防治骨质疏松的作用机理,本研究通过切除大鼠卵巢建立骨质疏松动物模型,观察复方补肾中药对去卵巢大鼠骨质疏松的作用,并通过其对骨组织中白细胞介素(IL)IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)和IL-6的影响探讨补肾中药的作用机理。1实验材料1.1动物三月龄SD雌鼠50只,体重200～220g,山西医科大学动物实验中
3、心提供。1.2药物益坤精胶囊主要由菟丝子、巴戟天、肉苁蓉、枸杞子、生地黄、当归等药组成,山西医科大学第二临床医学院制剂室提供,每粒剂量0.3g；尼尔雌醇,北京四环制药厂生产,每片1mg,批号20010801。1.3试剂血清雌二醇(E2)放射免疫分析测定盒由中国原子能科学研究院同位素研究所提供。IL-1、IL-6和TNF-α放射免疫分析测定盒由中国人民解放军总医院科技开发中心放免所提供。Hank's液、1640液、Schcidde液均根据文献配制。1.4仪器双能X线吸收测量仪(美国Lunar公司生产)、CO2培养箱RCO3000TVB、离心机LD-24-0.8
4、型、γ-计数器GAMMA-C12型。2实验方法2.1动物分组及造模3月龄SD雌性大鼠50只,随机分为5组,每组10只,即假手术组、去卵巢组、尼尔雌醇组、中药高剂量组、中药低剂量组。分组后,假手术组在无菌条件下,以40mg/kg体重的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,俯位固定,经腰椎旁切口进入大鼠腹腔背侧,将卵巢提出腹腔,再送回关腹。其余各组均在相同条件下切除双侧卵巢,然后止血缝合。术后1周行阴道涂片,确定无动情周期变化者为造模成功。2.2动物给药及喂养造模成功后,中药高剂量组以益坤精胶囊1.44g/kg体重灌胃,中药低剂量组以益坤精胶囊0.72g/kg体重灌胃,每日1
5、次；尼尔雌醇组0.25mg/kg体重灌胃,每两周1次,用药间歇期每天灌以等体积的生理盐水；假手术组、去卵巢组每天灌以等体积的生理盐水。给药时间为10周。各组大鼠于室温下分笼饲养,自由摄取标准饲料,自由饮用蒸馏水。2.3检测项目2.3.1骨密度测定将大鼠以戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,四肢展开平置于双能X线吸收测量仪平台上,测定大鼠全身的骨密度。2.3.2雌激素测定处死前内眦静脉采血,离心后提取血清,-20℃保存待测。采用放射免疫法(RIA)检测血清E2水平。2.3.3组织形态学观察大鼠股骨干骺端,以10%甲醛常规固定,Schcidde液脱钙处理后石蜡制片。HE染
6、色,光镜下观察。2.3.4骨组织培养及IL-1、IL-6和TNF-α测定无菌条件下取大鼠右侧股骨及胫骨,Hank's液反复冲洗,用骨钳将其分离为1mm3碎块,称量2g,置于3mL含5%胎牛血清的RPMI1640培养液中,常规条件下(37℃、100%湿度、φ=5%CO2培养箱中)培养48h,吸取培养液,离心后取上清液,RIA法检测IL-1、IL-6和TNF-α的含量。2.4统计学方法所有指标均以—x±s表示,统计分析采用SPSS10.0软件进行多均值单因方差分析,用LSD法进行两两比较。3结果3.1各组大鼠骨密度、血清雌二醇含量(见表1)表1各组大鼠骨密度及血
7、清雌二醇含量比较(略)注：与去卵巢组比较,*P0.01,**P0.05；与假手术组比较,ΔP0.01ΔΔP0.05。3.2骨组织中IL-1、IL-6和TNF-α含量的变化(见表2)表2各组大鼠骨密度及骨组织中IL-1β、IL-6和TNF-α含量的比较(略)3.3骨组织形态学观察去卵巢组股骨干骺端骨小梁明显变稀疏、断裂,皮质骨变薄,骨髓腔相对扩大,部分区域骨小梁消失。对照组及治疗组股骨干骺端骨小梁丰富,皮质骨致密,小梁排列以纵向为主。在皮质骨形成表面,治疗组均可见成对状排列、似上皮细胞样覆盖于新生骨表面的成骨细胞。4讨论本实验结束时,与假手术组比较,去卵巢组大
8、鼠骨密度明显降低,股骨干骺端骨小梁明显稀疏、断裂,表
