牛膝脱皮甾酮对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用论文

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1、牛膝脱皮甾酮对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用论文董群伟，陈志峰，陈少青，孙奋勇，胡伶平，洪曼杰,梁超【摘要】目的探讨牛膝脱皮甾酮（achyranthesbidentataecdysterone,ABE）对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用。方法选用8月龄SD雌性大鼠随机分5组:假手术组、去卵巢组、低剂量牛膝脱皮甾酮处理组ABEⅠ、中剂量牛膝脱皮甾酮处理组ABEⅡ、高剂量牛膝脱皮甾酮处理组ABEⅢ，以及αD3处理组，药物灌胃.freelizedrats.Methods8montholdSDfemaleratsgroup,ovariectomizedgroupand

2、thethreegroupsreceiveddifferentdosesofABErespectivelyforthreemonths.Theparameterseasuredafterthesacrificeoftherats.ResultsTreatmentiddledosageofABEprovingbonedensityasechanicalandbonehistomorphometricindexesinovariectomizedrats,entofosteoporosisinovariectomizedratsinadosedependentm

3、anner.Keyineraldensity(BMD)；biomechanicaltesting；histomorphometry绝经后骨质疏松症（postmenopausalosteoporosis，PMO）是原发性骨质疏松症中最常见的一种，其患病率为30%～50%。骨质疏松症具有骨显微结构的退化（骨小梁变细、断裂、小梁孔隙增大等）及骨强度降低，遇轻微创伤便易发生骨折［1］。妇女在绝经前后最常发生的是桡骨远端骨折及椎体压缩骨折。因此，骨质疏松症的防治已受到世界各国的重视。防治目的是减轻痛苦，预防发生骨折，提高老年妇女生活质量。怀牛膝为苋科植物牛膝的干燥根,为

4、“四大怀药”之一。具有补肝肾、强筋骨、逐瘀通经、引血下行之功,主要用于腰膝酸痛、筋骨无力、经闭症瘕、肝阳眩晕之症。历代文献明确为治疗“骨痹”、“骨痿”的方剂共21个，涉及药物77种，其中牛膝出现11次。课题组在前期研究工作中运用中药血清学、反义核酸封闭、cDNA芯片等多种技术发现牛膝脱皮甾酮(ABE)能够有效促进成骨细胞的增殖，其分子机制与PKA介导的通路有关［2-4］。本研究拟通过去卵巢大鼠的动物模型，观察牛膝脱皮甾酮对绝经后骨质疏松的治疗作用，以进一步阐明中药牛膝抗骨质疏松的作用，为牛膝脱皮甾酮的临床应用打下基础。1材料与方法1.1试剂与动物牛膝脱皮甾酮（

5、achyranthesbidentataecdysterone,ABE）由美国犹他州立大学药学院王兴河教授惠赠。αD3，以色列梯瓦制药工业有限公司生产。8月龄雌性SD大鼠（合格证号：粤检证字第2006A047号），体质量(267.18±21.15)g,按清洁级标准饲养，大鼠可以自由进食和饮水，各组大鼠均无妊娠和生育史。1.2动物模型制备8月龄未交配的雌性SD大鼠分笼饲养，自由摄食和摄水，使用标准饲料，其中钙含量1.33%，磷含量0.95%。随机分为假手术组、去卵巢组及ABEⅠ、Ⅱ、Ⅲ组、αD3组（阳性对照），每组10只。除假手术组（单纯切开皮肤不做卵巢切除

6、）大鼠外，其余行双侧卵巢切除术，假手术组和去卵巢组均用体积分数为50%的乙醇(溶剂对照)0.5mL,ABEⅠ、Ⅱ、Ⅲ组分别用1.0,2.0,4.0mg/kg/dABE灌胃给药。所有动物给药时间为5周，每周称体质量1次，按体质量变化调整给药量，各组体质量均无明显差异。此外，各组小鼠的雌激素水平都采用雌二醇试剂盒(Sigma公司)严格监控，在整个饲养过程中都没有明显变化，假手术组雌激素水平为（17.88±2.45）pg/mL，其余各组雌激素水平为（9.31±0.58）pg/mL。1.3大鼠血清生化指标的检测全自动生化分析仪测定血清Ca、P及碱性磷酸酶(alkali

7、nephosphatase，ALP)的活性。1.4大鼠骨密度的检测采用美国Hologic双能X线骨密度仪(精度1%;CV1%,g/cm2)检测腰椎骨(L1-5)和左股骨的骨密度(bonemineraldensity,.freel,点分辨率为0.0640cm。1.5离体股骨生物力学指标的检测取大鼠左股骨,去除附着肌肉及近侧端关节软骨,用-80℃的超低温冰箱保存。使用时从冰箱取出复温,以万能电子材料试验机进行生物力学检测。1.6骨组织形态计量学分析取大鼠右股骨标本，放入70%（φ）酒精，4℃冰箱内固定3d后，依次放入80%、95%酒精中脱水各24h,纯丙酮中脱水2

8、次，二甲苯透明2次，渗透液内渗透过夜。