资源描述：
《补肾中药对增龄大鼠成骨细胞cbfα1表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、补肾中药对增龄大鼠成骨细胞Cbfα1表达的影响论文.freelechanismsofChinesemedicineonboneformation.MethodsRatosteoblastfromdifferentagedonors(6monthsand16months)ent-migrating-groethod.Thebiologicalcharacteristicicroscopeandidentifiedineralizingnodulestaining.TheexpressionofCbfα1inedbyRT-PCRandimmunohistochemistry.Res
2、ultsRT-PCRandimmunohistochemistryshoedicineamongBushenChinesemedicinepromotedboneformation.Keyedicine；core-bindingfactorα1；osteoblast；rat一般认为,.freelodeling)完成的。骨质疏松症骨丢失的潜在机理是骨重建过程的失调。目前的研究已证实核心结合因子α1(Cbfα1)是促进骨形成的关键因子。本实验以增龄大鼠成骨细胞为研究对象,探讨补肾中药对增龄成骨细胞Cbfα1的影响,以进一步提高补肾中药对骨质疏松症防治的有效性1。1实验材料1.1动物
3、正常6月龄及16月龄SD大鼠各2只,上海中医药大学实验动物中心提供。适应性饲养3d后,提取骨组织以培养原代成骨细胞。正常6月龄SD大鼠70只,体重为(270±20)g,雌雄各半,上海中医药大学实验动物中心提供。适应性饲养3d后,随机分为7组：正常组、生理盐水组、单味补阳组、复方补阳组、复方平补组、复方补阴组和西药对照组。灌胃后制备含药血清。.2药物、试剂和仪器知柏地黄丸,兰州佛慈药厂生产,批号019804；补肾益精方,上海中医药大学附属曙光医院制剂室生产,批号010521；固本壮骨胶囊,浙江迪耳药业有限公司生产,批号021012；金匮肾气丸,兰州佛慈药厂生产,批号019604；
4、萌格旺,日本帝人株氏会社生产,批号5699。所有药物用前均以蒸馏水配制成混悬液。DMEM/HamF12(美国Gibco公司)；胰蛋白酶(Promega,1∶250)；新生小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；青霉素、链霉素(上海第二制药厂)；Trizol(Invitrogen)；RNA逆转录试剂盒(Biotech)；抗Cbfα1抗体及二抗(SantaCruz)；SABC免疫组化试剂盒(武汉博士德公司)。紫外分光光度计(Beckman,德国)；H6-1微型电泳槽(上海精益有机玻璃制品仪器厂)；PCR扩增仪(MJResearch)；紫外成像分析系统(上海天能科技有限公司)；T
5、anonGIS凝胶图像处理系统3.70版(上海天能科技有限公司)。2实验方法2.1成骨细胞培养分别取6月龄和16月龄SD大鼠,0.3%戊巴比妥钠麻醉(1mL/100g),无菌条件下取双侧股骨两端,剔除骨膜和周围结缔组织,无菌PBS液反复冲洗3次,剪成约1mm3大小的骨粒,PBS液反复冲洗至骨粒呈白色,将骨粒均匀接种于含20%灭活新生牛血清DMEM/F12(1∶1)培养液的培养瓶中,翻转培养法培养于37℃、5%CO2培养箱中。2周后换液,以后每隔2d换1次培养液,细胞生长融合达80%时,用0.25%胰蛋白酶消化传代,以1.6×104个/cm2细胞密度接种于25cm2培养瓶中。实验
6、用第2代培养的细胞。2.2成骨细胞鉴定成骨细胞汇合达80%后,0.25%胰酶消化,以3×105个/mL密度接种于6孔培养板中,每隔2d换液,观察矿化结节染色,橘红色为阳性。2.3制备含药血清各实验组均按体表面积折算动物等效剂量的方法给予复方补阴中药知柏地黄丸、复方平补中药补肾益精方、单味补阳中药固本壮骨胶囊、复方补阳中药金匮肾气丸和西药萌格旺,于首次灌胃间隔2h后再次给药,并于末次给药后1h采血,对照组给予等量生理盐水灌胃,正常组自由进水。动物麻醉后,无菌条件下腹主动脉取血,4℃、3000r/min离心10min,取上清,56℃、30min灭活,经0.22μm滤膜抽滤除菌,分装
7、,-30℃保存备用。2.4含药血清对成骨细胞的干预细胞接种于6孔培养板,当细胞汇合达60%,换无血清培养液培养细胞24h后,加入各组含药血清(浓度为10%)再继续培养3d,进行指标检测。2.5Cbfα1mRNA的表达引物：Cbfα1(205bp)Sense：5’-GGTGGTCTGAGCTGGGATAC-3’,Antisense：5’-TAGGGTCAATGACACGACCA-,3’,GAPDH(214bp)Sense：5’-AGCTGGTCATCAATGGGAG-3’,Antisense：
