蛋白激酶g在钙化血管中作用

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1、中文摘要蛋白激酶G在钙化血管中的作用摘要目的：骨、牙齿之外的非骨性组织发生钙化，伴或不伴组织坏死或损伤，均称为异位钙化。心血管系统的异位钙化常见于老年人及高血压、动脉粥样硬化、糖尿病和慢性肾病患者，包括动脉内膜(动脉粥样硬化相关钙化)、动脉中层(Mo“nckeberg’Ssclerosis)$FI心脏瓣膜钙化，无论发生在哪个部位，都会引起血流动力学和机械力学的改变，使动脉管壁僵硬，收缩压升高、舒张压降低，脉压差增大，冠状动脉灌注降低，最终将导致左室肥大、心肌缺血和心律失常，并增加卒中和猝死的危险。血管钙化是动脉粥样硬化、糖尿

2、病、肾病、衰老、高血压等多种疾病的病理生理基础，是心血管疾病的主要危险因子，出现在80％血管损伤和90％冠脉疾病中。较无钙化者，任何程度的冠状动脉钙化整体相对危险度为4．3，3～5年冠心病事件(心肌梗死或心源性死亡)增加4倍。深入研究血管钙化的发病机制，预防、延缓或逆转血管钙化的发生，具有重要的临床立、、，思义。既往认为血管钙化是过饱和的钙、磷在血管壁的被动沉积，近年证实是由细胞和分子参与的、类似于骨形成的主动过程。钙调神经磷酸酶(Calcineurin，CaN)是丝氨酸／苏氨酸蛋白磷酸酶家族成员，分类上属于PP2B家族，是

3、唯一受Ca2+／钙调素调节的磷蛋白磷酸酶。CaN主要表达于细胞浆中，组织分布广泛，通过使底物活化T细胞核因子中文摘要(NuclearfactorofactivatedTcells。NFATs)去磷酸化和核内转位，激活下游基因转录，参与多种细胞功能调节。环鸟苷酸依赖的蛋白激酶(cGMP．dependentproteinkinase，PKG)是广泛存在于真核细胞内的一种丝／苏氨酸蛋白激酶，存在于多种组织细胞，是重要的信号分子NO的下游底物，能够在多种水平调节Ca2+水平，从而参与多种细胞功能调节。近年研究己证实CaN能够抑制培养

4、血管平滑肌细胞(VSMCs)胞浆内PKGI的表达，而CaN在钙化血管中与PKG的关系目前国内外尚未见有报道。本试验采用华法令和维生素D，建立大鼠血管钙化模型，测定主动脉CaNmRNA、蛋白质的表达与活性及PKGmRNA、蛋白质的表达，并观察CaN对PKG表达的影响，初步探讨CaN及PKG对血管钙化的调节作用，为血管钙化的临床防治提供新的思路。方法：4wSD雄性大鼠36只，体重80～909，随机分为3组，每组12只。A组：对照组；B组：钙化组；C组：环孢霉素A组；实验第1—8天，各组均给予维生素K。15mg·kg-1．d～，皮

5、下注射。同时，C组另给予环孢霉素A10mg·kg"1．d。1腹腔注射；A组和B组分别给予等量生理盐水腹腔注射。第3天开始，B、C组另给予维生素D33×105U·kgi'd一，皮下注射，持续至实验第5天，同时给予华法令15mg·1009～，12h一次，皮下注射，持续至第8天；对照组在相同时间给予等量生理盐水皮下注射。实验第9天，所有动物麻醉后处死。开胸，暴露出心脏，分离胸主动脉，并向下剖开腹部，分离出腹主动脉，从主动脉根部至腹主动脉分叉处剪下主动脉。取材后每组各取6只以免中文摘要疫组化法测定CaNBl蛋白及PKGI。蛋白，原位

6、杂交法测定CaNAamRNA及PKGI。mRNA；6只用于CaN和碱性磷酸酶(ALP)活性测定。将免疫组织化学和原位杂交结果应用Image．ProPlus图象分析软件，分别计算各组主动脉组织相同面积内阳性细胞的累积光密度值(integratedopticdensity，IOD)。所有数据以均数4-标准差(i士s)表示，运用SPSS13．0统计软件，首先对计量资料进行正态性检验及方差齐性检验，组间资料比较应用单因素方差分析，两两比较应用LSD．t检验，p<0．05即有统计学意义。结果：(1)HE染色结果示对照组大鼠主动脉壁结构

7、完整，中层血管平滑肌细胞(VSMCs)排YlJ整齐；钙化组和环孢霉素A组大鼠主动脉中层VSMCs排列紊乱，弹力纤维迂曲断裂。VonKossa染色示钙化组大鼠主动脉中层弹性纤维间有大量黑色颗粒沉积；环孢霉素A组大鼠主动脉中层弹性纤维间亦可见黑色颗粒沉积；对照组未见明显黑色颗粒沉积。(2)免疫组织化学结果显示三组大鼠主动脉可见一定量CaNBl蛋白及PKGId蛋白表达，主要位于胞浆内。钙化组与对照组对比：钙化组大鼠主动脉CaNBl蛋白(8731．93+469．92)较对照组(5500．95+982．57)表达明显增加(p

8、)，PKGIa蛋白(2305．108+628．08001)较对照组(4960．409+911．34036)表达明显减少(p