去泛素化酶USP22参与ERα介导的基因转录调控及其在血管钙化中的作用

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1、分类号：R592单位代码：10159密级：公开学号：201520216硕士学位论文中文题目：去泛素化酶USP22参与ERα介导的基因转录调控及其在血管钙化中的作用英文题目：TheeffectsofDeubiquitinenzymesUSP22onVascularCalcificationviaparticipatinginERαmediatedgenetransactivation论文作者：李蕊指导教师：田文教授学科专业：老年医学完成时间：2018年3月中国医科大学硕士学位论文去泛素化酶USP22参与

2、ERα介导的基因转录调控及其在血管钙化中的作用TheeffectsofDeubiquitinenzymesUSP22onVascularCalcificationviaparticipatinginERαmediatedgenetransactivation论文作者李蕊指导教师田文申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科老年医学研究方向心血管论文起止时间2018年1月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月中国医科大学学位论文独创性声明本人郑重声

3、明：本论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究成果，论文中除加以标注的内容外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本研究提供贡献的其他个人和集体均已在文中进行了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：年月日中国医科大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本

4、人授权中国医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密（），在年后解密适用本授权书。（保密：请在括号内划“√”）论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日中国医科大学硕士学位论文摘要目的：随着老龄人越来越多，血管钙化（vascularcalcification，VC）发病率越来越高；VC，作为心血管疾病的并发症，增加其发病率和死亡率。临床研究表明，雌激素疗法明显降低冠状动脉钙化的发病率。一些实验研究显示，雌激素E2

5、/雌激素受体α（ERα）通过影响COX2，RANKL，Gas6进而抑制VC。提示雌激素受体α（ERα）在VC中扮演着重要保护角色。ERα是核受体重要成员之一。去泛素化酶USP22是泛素蛋白酶系统的组成部分，也许在心血管疾病中发挥重要作用，但其机制未见报道。USP22作为核受体的辅调节因子，在前列腺癌中参与雄激素受体（AR）介导的基因转录调控。USP22是否参与ERα介导的基因转录调控未见报道。本研究目的建立人主动脉平滑肌细胞（hASMCs）钙化模型，证实USP22参与ERα介导的基因转录调控进而在血管

6、钙化中发挥重要作用。方法：将hASMCs分别接种于正常DMEM培养基，含1.25Mmol/Lβ-磷酸甘油和0.625Mmol/L氯化钙（1.25MmCAL）、2.5Mmol/Lβ-磷酸甘油和1.25Mmol/L氯化钙（2.5MmCAL）、5Mmol/Lβ-磷酸甘油和2.5Mmol/L氯化钙（5MmCAL）的钙化DMEM培养基中培养0、3、7、9天。用1%/2%Alizarin-redS染料染色，在倒置相差显微镜下成像；在5MmCAL条件下培养0，3，7，9天，Westernblot实验检测钙化相关蛋白

7、BMP2，RANKL，COX2，Gas6，ERα的表达。荧光素酶双基因报告实验检测在hASMCs中，去泛素化酶USP22是否参与ERα介导的基因转录调控；过表达USP22，Westernblot实验检测钙化相关因子BMP2，RANKL，COX2，Gas6，ERα的蛋白表达。结果：在1.25MmCALDMEM培养条件下第9天hASMCs有明显的钙沉积；在2.5MmCAL、5MmCALDMEM培养条件下第7天hASMCs出现钙沉积，第9天有明显钙沉积。hASMCs在5MmCALDMEM培养条件下，BMP2

8、蛋白表达增加，提示平滑肌细胞表型向成骨表型转变；去泛素化酶USP22蛋白表达增加，提示USP22可能促进hASMCs钙化。荧光素酶双基因报告及过表达USP22后westernblot实验结果显示USP22抑制ERα介导的下游基因Gas6转录调控进而促进hASMCs钙化。结论：在5MmCAL浓度培养的条件下，平滑肌细胞表型向成骨表型转变；去泛素化酶USP22蛋白表达增加，可知USP22可能推动了血管钙化（VC）的进程。I中国医科大学硕士学位论文USP22抑