蛋白激酶c活性在脑血管痉挛过程中的变化

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1、蛋白激酶C活性在脑血管痉挛过程中的变化作者：周任　柏鲁宁　吕健　崔刚　巩守平　师蔚【摘要】　　目的探讨蛋白激酶C(PKC)活性在脑血管痉挛(CVS)过程中的变化及其意义。方法日本大耳白兔25只，随机分为对照组(5只)与模型组(CVS组，20只)，CVS组又分为1、3、5、8d组，每组5只。采用枕大池2次注血法建立脑血管痉挛动物模型，血管造影观察基底动脉(BA)痉挛，放射免疫法和放射性同位素标记蛋白激酶测定法动态测定血浆内皮素和兔BA管壁PKC活性。结果枕大池2次注血法可以成功构建脑血管痉挛模型，是一种简便、可靠的方法；模型组血浆中内

2、皮素含量和BA壁内PKC的活性均明显升高，且在5d组达到峰值，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论PKC活性与CVS的严重程度呈正相关。【关键词】脑血管痉挛；蛋白激酶C；内皮素　　PKCactivitychangeintheprocessofcerebralvasospasm　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethechangeofprotEinkinaseCintheprocessofcerebralvasospasm(CVS)andevaluateitssignificance.

3、MethodsThesubjectsorrhagemethododel,angiographyedtoobservethecerebralvasospasmofthebasilarartery,andETlevelandPKCactivityeasuredmunoassayandradioisotopicprotEInkinaseassaykit.ResultsThetorrhagerabbitmodelpleandreliableone.ETlevelinthebloodplasmaandPKCactivityoftheba

4、silararteryvessel(CVS);proteinkinaseC(PKC);endothelin(ET)　　脑血管痉挛(cerebralvasospasm,CVS)是影响蛛网膜下腔出血(subarachnoidhemorrhage,SAH)预后的重要因素[12],其病理生理机制目前尚不十分清楚。近年来研究表明，细胞信号传递系统中的重要信号分子蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)可能在SAH后CVS发生发展中起重要作用[3]。PKC是一类Ca2+磷脂依赖性蛋白激酶，通过催化多种蛋白质上的Ser/Thr磷酸化，

5、调节细胞的代谢、生长、增殖和分化。在本研究中，我们采用兔枕大池2次注血法成功建立CVS模型,动态观察CVS病理过程中血浆中内皮素(endothelin,ET)和基底动脉(basilarartery,BA)内PKC活性的变化,探讨PKC与CVS的关系,为进一步揭示CVS的病理机制提供新的线索。　　1材料与方法　　1.1主要试剂[γ32P]ATP(3000ci/mmol)购自Amersham公司；PKC检测盒购自Promega公司；蛋白质定量试剂购自Pierce公司；TritonX100购自Sigma公司；DE52购自ASSTRAN

6、SIT微导管盒购自美国强生公司。　　1.2方法　　1.2.1动物模型的建立日本大耳白兔25只，体重2.3-3.0kg，平均2.8kg，雌雄不限，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。动物模型采用枕大池2次注血法建立，第1次行枕大池穿刺并缓慢注入未肝素化自体动脉血2.5mL，48h后，再次注血2.0mL。　　1.2.2实验分组将所有实验动物分为2组：对照组5只；模型组(CVS组)20只，又分为1、3、5、8d组，每小组5只。分别在第2次注血后第1天、第3天、第5天及第8天行椎动脉造影，然后经耳中央动脉抽血2mL后处死取脑。　　1.2.

7、3基底动脉造影运用美国强生Cordis3FMASSTRANSIT微导管盒和飞利浦数字减影机进行兔选择性脑血管造影。分离兔的股动脉，直视下穿刺，X线指引下，将导管和导丝送入到锁骨下动脉的开口，快速注射造影剂，基底动脉能较好的显影；而颈内动脉系统不显影。　　1.2.4ET含量检测经兔耳中央动脉取血2mL，置于预先加入100g/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA)30μL和抑肽酶40μL的试管内，混匀，在4℃，3000r/min离心10min，分离上清液，放于-20℃的冰箱内保存。测定前，使样品置于室温或冷水中复融，再次4℃，3000r/min

8、离心5min，取上清液测定。分离上清液按照内皮素试剂盒说明进行测量。　　1.2.5PKC活性检测经耳缘静脉快速推注空气50mL处死兔,迅速开颅取含有基底动脉全长的脑干及部分小脑组织，立即浸入盛有冰浴的PBS烧杯中。眼科剪仔细剪除表面蛛