小鼠次级淋巴样组织趋化因子真核表达载体构建及其体内外趋化功能的研究

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1、中国协和医科大学八年制毕业论文英文缩写SLCmSLCDNARNAmRNAcDNAbpkbkDdNTPBlastCTL删C^PCDcNl【IgDEPCDTTPcRRTGM_CSFX-galODNeoFBSCIHEPBSrpm英文缩写对照表英文全名SecondarylymphoidtissuechemokinemurineSLCDeoxyribonucleicacidRibonucleicacidMessengerribonucleicacidComplementaryDNABasepairkilobasepairskilodaltonDeoxynucleotid

2、etriphosphatebasiclocalalignmentsearchtoolCytotoxicTlymphocyteMajorhistocompatibilitycomplexAntigen-presentingcellDendriticcellNaturalkillercellImmunoglobulinDiethylpyrocarbonateDithiothreitolPolymerasechainreactionReversetranscriptionGranulocytemacrophage——colony—’stimulatingfactor

3、5一bromo一4一chloro一3～indo]yi-B—-D——galactosideopticaldensityneomycin-resistancegeneFetalbovineserumChemotacticindexhematoxylinandeosinphosphate—bufferedsalineroundperminute中文次级淋巴样组织趋化因子小鼠SLC脱氧核糖核酸核糖核酸信使RNA互补脱氧核糖核酸碱基对千碱基对千道尔顿脱氧三磷酸核苷酸局部序列对准搜寻基础工具细胞毒性T淋巴细胞主要组织相容性复合物抗原提呈细胞树突状细胞自然杀伤细胞免疫球蛋白

4、焦碳酸二乙酯二硫苏糖醇聚合酶链反应逆转录粒～巨噬细胞集落刺激因子5一溴一4一氯一3一吲哚一B—D一半乳糖苷光密度新霉素抗性基因胎牛血清趋化指数苏木精和曙红磷酸盐缓冲溶液转／分中国协和医科大学八年制毕业论文小鼠次级淋巴样组织趋化因子真核表达载体的构建及其体内外趋化功能的研究中文摘要本论文的工作意在克隆小鼠次级淋巴样组织趋化因子(SLC)基因，并构建其真核表达载体pcDNA3．1(+)-mSLC，继而研究这一真核表达载体在体内外的表达，以及表达产物的免疫趋化功能。为此，首先用RT．PCR的方法从C57BL／6小鼠胸腺组织克隆出SLC基因，并通过测序证明这一基因即为

5、小鼠SLC基因Scya21b型；继而构建真核表达载体pcDNA3．1(+)一mSLC。Invitro，利用基因枪、脂质体、电穿孔的方法，将pcDNA3．1(十)一mSLC分别转染至小鼠黑色素瘤细胞系B16F10、B16P15和小鼠红白血病细胞系FBL．3，通过趋化小室趋化实验检测表明，转染SLC基因的肿瘤细胞培养上清具有针对淋巴细胞的趋化功能。Invivo，利用基因枪的手段，对小鼠皮肤局部转染SLC基因。通过皮肤病理检查发现，与转染空载体相比，基因枪轰击局部皮内有明显的淋巴细胞浸润。说明基因枪介导的SLC基因在体内能够表达，并具有趋化活性。用G418对转染SL

6、C基因的B16P15、FBL．3细胞进行持续筛选，得到成功转染pcDNA3．I(+)-mSLC的肿瘤细胞，用于进一步研究SLC基因修饰的肿瘤细胞生物学行为的改变。关键词：次级淋巴样组织趋化因子趋化功能基因枪基因转染中国协和医科大学八年制毕业论文ConstructionofeukaryoticexpressionvectorofmurineSLCgeneandstudyofthechemotacticfunctioninvitroand／nvivoAbstractSecondarylymphoidtissuechemokine(SLC)isflCCchemoki

7、nethatisstronglyexpressedinT-cell-richareasoflymphoidorgans．ItsreceptorCCR7isexpressedinCD4+andCD8+TcellsaSwellasmaturedendriticcells(DCs)SLChasbeenidentifiedasflmajorfactorinthehomingoflymphocytesandDCstolymphoidtissuesandasanimportantregulatorforeffectiveinitiationandcontrolledmai

8、ntenanceofantigensp