鸭肠炎病毒gc基因疫苗诱导balb2fc小鼠免疫发生的分析

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1、炎病毒(Duckenteritisvirus，DEV)引起的，发生于鸭、鹅及多种雁形目动物的一种的急性、高度接触性传染病。基因疫苗以其独特的优势在基因工程疫苗研究中备受关注。本研究对DEVgC的理论免疫原性和gC基因疫苗对BALB／c小鼠的免疫原性及其免疫佐剂等开展系列研究，获得以下结果：1．鸭肠炎病毒gC基因免疫原性理论预测：同源性分析显示DEVgC与MDV-1、MDV-2gC的同源性最高和亲缘关系最近；功能预测显示DEVgC可能属于免疫反应基因范畴，具有细胞外膜蛋白功能和酶性质，但不属于任何一种酶类，进～步对其结构与功能预

2、测发现21～54、48"-'68、160～200aa可能与肝素结合有关，29～110aa与gC阻碍备解素与C3b结合有关，1684--225和254---，332aa与gC与C3b结合有关；细胞表位的预测显示DEVgC存在丰富的T和B细胞表位，表明DEVgC可能具有良好免疫原性。2．壳聚糖作为pcDNA．DEV-gC疫苗递送载体：制备和生物学特性研究：壳聚糖／DEVgC基因疫苗复合物制备标准化，具有较高的重现性，包封率为95．60／硅0．8，形态均一，呈球形，直径在50．80nm之间，4"C能够稳定保存，低质粒降解率，转染率较

3、好，低细胞毒性。因此，壳聚糖是DEVgC基因疫苗安全有效递送载体。II四川农业大学硕士学位论文3．阳性脂质体作为pcDNA—DEV—gC疫苗递送载体：制备和生物学特性研究：阳性脂质体／DEVgC基因疫苗复合物制备标准化，具有较高的重现性，包封率为76．40／o_-t：0．8，形态均一，呈球形，直径在400．700nm之间，4℃能够稳定保存，低质粒降解率，转染率高，低细胞毒性。因此，阳性脂质体是DEVgC基因疫苗安全有效的递送载体。4．检测鼠抗DEV特异性血清IgG和肠道分泌IgA的间接ELISA方法的建立：两种间接ELISA方

4、法的抗原包被浓度分别为0．599／ml和lgg／ml，一抗工作浓度分别为l：8和原液，酶标抗体工作浓度为1：5000和1：8000，一抗孵育温度和时间都为37℃lh，酶标抗体孵育温度和时间分别为37℃1h和37℃2h，底物作用时间都为40min，阴阳性临界值分别为0．259和0．297，具有良好的特异性和重复性，为基因疫苗的体液免疫和粘膜免疫检测提供了稳定的检测方法。5．鸭肠炎病毒gC基因疫苗诱导BALB／e小鼠免疫发生的研究：pcDNA-DEV-gC基因疫苗能够诱导小鼠产生一定程度的细胞免疫、体液免疫和粘膜免疫。基因枪轰击和

5、肌注途径诱导T淋巴细胞增殖、CD4+和CD8+T淋巴细胞免疫应答优于口服途径，基因枪轰击诱导体液免疫应答的能力较肌注和口服途径强，三种免疫途径中仅口服途径产生黏膜反应。基因枪轰击细胞和体液免疫应答具有一定的剂量相关性，而肌肉注射仅在细胞免疫方面。递送载体可显著提高机体的细胞免疫和粘膜免疫水平，其中阳性脂质体偏重细胞免疫，壳聚糖偏重粘膜免疫，具有良好的佐剂效应。与弱毒疫苗相比，基因疫苗诱导细胞免疫应答的能力优于弱毒疫苗，而弱毒疫苗诱导体液免疫的能力更强。关键词：鸭肠炎病毒gC基因疫苗；细胞免疫；体液免疫；粘膜免疫；佐剂III四川

6、农业大学硕士学位论文StudiesontheImmunogenesisinBALBIcmiceImmunizedwithgCGeneticVaccineofDuckenteritisvirusM．Agr．candidate：JiangJinfeng(PreventiveVeterinaryMedicine)DirectedbyProfessor：WANGMingshuCHENGAnchunABSTRACTDuckviralenteritis(DVE)，alsoknownasduckplague，isanacuteandcont

7、agiousdiseaseofducks，geeseandotheranimalsofAnseriformes，causedbyduckenteritisvirus(DEV)．Genevaccineattractsstudyofgeneticengineeringvaccines，becauseof磊itsuniqueadvantage．AseriesofresearchwerecarriedontheoreticalimmunogenicityofDEVgC，immunogenicityandimmunoadjUVantso

8、fitsgenevaccineinBALB／cmice，andSOon．thecontentsweresummarizedasfollows：1．ValuationoftheoreticalimmunogenicityofgCgeneofduckvirusenteritis·