il12和il18基因免疫对hbcag核酸疫苗诱导小鼠(h2d)特异性免疫应答的论文

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1、IL12和IL18基因免疫对HBcAg核酸疫苗诱导小鼠(H2d)特异性免疫应答的论文【摘要】目的：观察il12和il18基因免疫对hbcag核酸疫苗诱导小鼠(h2d)特异性体液免疫和细胞免疫应答的影响。方法：用肌肉注射法将hbv核心区dna疫苗、il12质粒和il18质粒接种balb/c小鼠；elisa法检测小鼠血清抗hbc(igg)及igg亚类(igg1、igg2a)；ldh释放法检测小鼠脾细胞hbcag特异性ctl活性。结果：免疫6周后，hbcagdna疫苗联合il12质粒、il18质粒和il12+il18质粒组小鼠的血清抗hbc终点滴度均明显高于单

2、纯注射hbcagdna疫苗组小鼠（p<0.05），抗hbcigg亚类以igg2a占优。dna疫苗免疫的各组小鼠，hbcag特异性细胞毒性t淋巴细胞杀伤率均高于对照组(p组)，其中c+il18组和c+il12+il18组中ctl值明显高于c组，尤以c+il12+il18组中的ctl杀伤率最高。结论：il12和il18基因与hbcagdna疫苗联合免疫，不仅能增强hbcag特异性体液免疫应答，而且能增强hbcag特异性ctl的杀伤活性。【关键词】乙型肝炎核心抗原dna疫苗小鼠il12il18　　theeffectsofil12andil18geicimmu

3、nizationsonhumoralandcellularimmuneresponsesinh2dmiceinducedbydnavaccinationofhbvcoregene　　oralandcelluarimmuneresponsestogenevaccinescodinghbvcoregene,il12andil18inbalb/c(h2d)mice.methods:thednavaccineofhbvcoreantigen,expressingplasmidsofil12andil18munizedintramuscularlyinjectioninbalb

4、/cmice.thelevelsofantihbc(igg)anditsisotypes(igg1,igg2a)ethods.hbcagspecificcytotoxictlymphocyte(ctl)activityeasuredbyldhreleaseassay.results:sixmunization,thelevelsofantihbcingroupsofmiceimmunizeduchhigherthanthatingroupofmiceimmunizediceimmunizedentionedabove.byparingphocytesingroupc,c+il

5、12,c+il18andc+il12+il18increased,andctlingroupc+il18andc+il12+il18increasedmoresignificantlythangroupc,especiallyinc+il12+il18.conclusion:theresultsinthisstudyshooralandcellularimmuneresponses.　　［keyouse；il12；il18　　在乙型肝炎病毒（hbv）感染慢性化进程中，th1/th2细胞因子的分泌紊乱，特别是th1类型细胞因子产生缺陷，导致针对hbv的细胞免疫

6、功能以及辅佐b细胞功能低下，病毒不易被清除。.　　dna疫苗是近年来发展起来的一种免疫方法，它是将编码特异性抗原的基因表达载体直接导入机体以激发机体产生特异性免疫应答。dna疫苗可以被体细胞摄取并表达相应抗原，进而激发起保护性免疫应答，包括特异性细胞毒性t淋巴细胞（ctl）应答及特异性抗体的产生。　　il12和il18均属于th1型细胞因子，具有许多类似的生物学活性，在诱导ifnγ生成和th1型免疫应答方面，两者相互协同。本研究采用以哺乳动物高表达质粒(pjidpurification(mega)kit(giageninc.,germany)。每1000mlhb101转化株

7、菌液可获高纯度质粒约2～4mg。　　1.2小鼠来源、分组及血清标本采集6～8周龄雌性balb/c(h2d)小鼠由上海动物实验中心提供。共设5组，每组6只小鼠，剪耳法编号。组别为pja公司的ldh细胞毒性检测试剂盒检测免疫小鼠脾细胞特异性ctl，按其说明书操作规程进行操作，简述如下。小鼠经末次免疫后4周(即第12周)时，在麻醉状态、无菌条件下取小鼠脾脏，制成单个脾细胞悬液。小鼠脾细胞用hbcag特异性ctl表位多肽(h2d限制性多肽为syvntnmgl)作刺激培养(37℃、6天