骨髓源性内皮祖细胞移植在肝纤维化大鼠肝内的示踪-研究

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1、withliverfibrosisinvitro．ThePKH26-1abeledcellsmaymigratetothelivervascularanddifferentiateintomatureendothelialcells．KEYWORDS：endothelialprogenitorcells，celltransplantation，PKH26，tracing，liverfibrosis目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．III引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1第一章肝纤维化大鼠骨髓源性EPCs的培养及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31．1材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．42结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．62．1肝纤维化大鼠模型的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．62．2EPCs的细胞形态⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．72．3EPCs的细胞表型和纯度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．72．4EPCs的功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．83讨{念⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10第二章EPCs移植在肝纤维化大鼠肝内的示踪研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13l材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131．1材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．131．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．152结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．，．．=．⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．1PKtl26标记EPCs的荧光染色及标记率⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．2PKH26标记EPCs的细胞动力学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．3PKH26标记的EPCs

4、在肝脏巾的定位及细胞表型表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯183讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．24参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．25综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．35致访}⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．39攻读学位期间发表的学术论文目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41V引i了引言肘纤维化是各种慢性Bl‘桶演，叟成H1。硬化的必经阶段，由于≥￡在功能性肘细胞相对减

5、少的同时，存在细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)的过度沉积，从而导致肝变状隙的缩窄、肝小血管的闭塞，故设法补充并促进其肝内血管新生已成为近年来研究的热点。细胞移植因其具自．来源，“泛、创伤性小、可以晕复进行等优点而越来越受到关注。其中骨髓来源的干细胞冈为其容易采集、能自我更新、并向多种类型细胞分化、且不涉及伦理道德问题等优势被认为足当Ij，『最具有治疗潜力的供体细胞。然而目前大多数学者均荩丁健康骨髓或外周血中去扶得内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)，从疾病个体能否获

6、得iF常EPCs的研究甚少，从腼限制了自体细胞移植的临床应用。从肝纤维化大鼠骨髓中提取flj经过体内病理环境的“筛选”作川后的EPCs，其更能适应所处的H『脏病理性内环境，增强细胞的适应性，提高作用效能。然而，存研究EPCs移植是否有益于肝纤维化的逆转之前，我们必须证实EPCs移植入体内后，能否种植于肝脏，能行聚集于血管，能否向ECs分化。那么，如何去了解EPCs在肝纤维化肝脏内的迁移和分化情况呢?设想应用红色荧光标记物PKH26去示踪EPCs，以了解其在肝脏的迁移、种植、分布和转化情况。很多研究jS环，PKH26标记后4i影响细胞

7、的增殖和活力，随细胞分裂，标记物几乎等份分配给两个子细胞，是目前理想的细胞移植的常用上具。应用四氯化碳(carbontetrachloride，CCl4)建立大鼠肝纤维化模型是目前最经典、成熟的造模方法，属于导致肝纤维化的多种病凶中的其中一种病凶，即毒物诱导型肝纤维化。而CCL4注射是否对骨髓细胞有影响，各种不刚的病凼导致的肝纤维化是否能从其骨髓中分选培养出正常的EPCs，我们还没有做此方面的研究。我们将在以后的研究中对此问题给以关注，比如建立多种大鼠肝纤维化模型，如胆汁淤积型、免疫血清型肝纤维化模型(后一种目前认为与临床上乙肝后肝

8、纤维化机制类似)等，探讨从多种病因导致的肝纤维化人鼠骨髑中能否获得正常EPCs。小研究得纠II．1家自然科学娘金‘30900598)的资助骨髓源性内皮稠细胞移植在肝宝f维化大鼠耵内的爪踪研究总之，我们拟应用四氯化碳CCI。皮卜．注射建