干细胞的磁性标记及肝内活体磁共振示踪

《干细胞的磁性标记及肝内活体磁共振示踪》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、干细胞的磁性标记及肝内活体磁共振示踪作者：徐健，郑敏文，宦怡，程康，赵海涛，郑敏娟，葛雅丽，孙立军【关键词】肝；干细胞；移植；超顺磁性氧化铁；磁共振成像　　InvivoMRtrackingofmagicallylabeledmesenchymalstemcellsinrabbitliver　　【Abstract】AIM：Tolabelbonemarrocellsagicironoxid(SPIO)andtoexploretheimagecharacteristicsandsignalattenuatio

2、nrulesofinvivothemagicresonanceimaging(MRI)ofthelabeledcellsinrabbitliver.METHODS：Marrocells(MSCs)rabbitandincubatedagedatmultipletimepointsbyMRIincludingT1aging(T1SCsinvivoafterliverinjection.RESULTS：Labeledcellsremainedviableformultiplepassagesandretai

3、nedinvitrotheabilitiesofproliferationanddifferentiation.SPIOlabelingcausedalooreobviousattenuationeffectonFFEthanonT1RI可对标记后的移植细胞进行活体内示踪，并可长期动态观察，这对进一步的实验研究和疗效观察研究具有重要意义.　　【关键词】肝；干细胞；移植；超顺磁性氧化铁；磁共振成像　　0引言　　来自于骨髓的干细胞（marrocells,MSCs)，在体内与体外均能分化为功能完备的肝细胞，肝

4、细胞移植在急慢性肝衰竭和遗传代谢性肝病方面具有很好的前景.但移植细胞的活体内示踪和更进一步的疗效观察却是一直以来研究面临的难题.自I)概念后，MI已经成为影像医学和相关临床医学的研究热点.研究者采用氧化铁颗粒标记移植干细胞进行了广泛的磁共振（MRI）活体示踪研究［2］.国内的相关实验研究也开始起步［3-4］.我们采用超顺磁性氧化铁（superparamagicironoxide，SPIO）进行兔活体内肝干细胞的MRI示踪研究，探讨其在正常肝脏内的成像特点和代谢规律等，为进一步对肝功能不全模型进行细胞移植

5、研究奠定预实验基础.　　1材料和方法　　1.1材料健康成年家兔11只，体质量2.4～3.0kg，雌雄不拘，第四军医大学动物试验中心提供.随机分为：①正常对照组1（n＝3），肝脏内注射未标记的骨髓干细胞；②正常对照组2（n=3），肝脏内注射SPIO；③标记细胞组（n=5），肝脏内注射标记SPIO的MSCs.细胞培养基DMEM（美国Gibco公司），胰蛋白酶（美国Sigma公司），FBS（美国Gibco公司），倒置显微镜（Olympus公司），超净工作台CJ1S（天津泰斯特仪器有限公司），CO2孵箱（日本池

6、本理化工业株式会社），分子天平（日立公司），离心机802（中国上海精密仪器厂），荧光显微镜TE20005（日本Nikon）.ATL5000彩色多普勒超声仪.SPIO注射液（德国Schering）：1.4mL/支，含铁浓度0.5mol/L，铁颗粒直径60nm.　　1.2方法　　1.2.1MSCs的分离、纯化、培养用30g/L戊巴比妥钠1mL/kg耳缘静脉麻醉.无菌操作下，分别在双侧髂后上棘与髂骨平行，由内上向外下穿入，每只抽取暗红色骨髓约2～3mL.将抽取的骨髓加入到含5mLDMEM液的无菌离心管中，充分

7、混匀.再把上述细胞悬液缓慢层加到含有4mL淋巴细胞分离液(比重为1077g/L)的无菌离心试管中,可见液体分层.常温下2000r/min离心20min后，可见离心试管内液体分为3层.收集中间云雾层的骨髓单个核细胞，加入到含4mLDMEM培养液的无菌离心管中，常温下以1500r/min离心洗涤10min两次后，倾去上清，然后用含肝细胞生长因子（HGF）20mg/L的DMEM培养液混悬.将分离的细胞进行计数，然后以2×108/L密度接种于25mL培养瓶.接种后将培养瓶置于37℃，50mL/LCO2及饱和湿度

8、的孵箱中培养.72h后更换培养液，此后视细胞生长状态每周换液2次.　　1.2.2MSCs的体外标记和铁浓度测定/标记率测定原代的MSCs培养液8mL，含细胞量1×106，Revosite与之按1∶80的比率加入100μL，在37℃,50mL/LCO2条件下共同孵化过夜，24h后用PBS液清洗两遍，然后加入2.5g/L胰蛋白酶1～2mL，静置2～3min，将胰蛋白酶倾倒，加入含100mL/L胎牛血清（FBS）的DMEM培养液终止消化，用弯头吸