受体骨髓干细胞在大鼠移植肝内向血管内皮细胞分化

《受体骨髓干细胞在大鼠移植肝内向血管内皮细胞分化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文受体骨髓干细胞在大鼠移植肝内向血管内皮细胞的分化硕士研究生：郭跃虎指导教师：高毅摘要背景：1963年，Starzl[tl成功施行了世界第一例临床原位肝移植(Orthotopiclivertransplantation，OLT)。几十年来，通过在器官保存、手术技术、抗排斥药物、术前术后处理等领域的重大进展，肝移植成为公认治疗终末期肝病的外科手段。移植术后的排斥反应仍然是威胁患者和移植物长期存活的主要原因【2】。移植排斥反应的本质上是由于供体作为异基因抗原侵入引起受体特异性免疫激活而造成对供体组织

2、结构和功能持续损伤的病理过程【3】。我们设想，移植的肝脏如果能够被特异性的受体细胞替代，逐渐转变为与受体基因类似或相同的器官，移植的肝脏就不会被排斥而长期存活。骨髓来源的干细胞主要包括造血干细胞fhematopoieticstemcells，HSCs)、间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)和多能成体祖细胞(multipotentadultprogenitorcells，MAPCs)等。具有多向分化潜能的骨髓干细胞具有广阔的临床应用前景。近期干细胞研究的进展证实，人类和啮齿类动

3、物的骨髓源干细胞可分化为多种细胞类型，包括骨骼肌细胞、心肌细胞、神经细胞和肝细胞、血管内皮细胞等[44]。自身成体骨髓干细胞可避免免疫排斥反应。在肝移植术后，受体特异性骨髓干细胞能不能回输到移植肝中，实现向受体自身肝组织细胞的分化，从而实现供肝的“受体化”，从而实现减轻排斥反应，改善肝脏功能呢?我们先期进行的实验中将与雌性受体大鼠同一品系的雄性大鼠骨髓源干细摘要胞经门脉同期输入来源于不同种系雌性大鼠的供肝，实验组的中位生存时间，肝脏功能明显优于对照组。在停用亚治疗剂量的免疫抑制剂后实验组大鼠长期存活，后期

4、病理检查未见明显排斥反应。成功诱导了免疫耐受状态的出现。我们发现移植的骨髓干细胞向肝样细胞横向分化，移植细胞的替代率60天可达(62．70士1．79)％；甲胎蛋白、白蛋白免疫组化双阳性移植细胞百分率分别为(55．53：L2．32)％，(56．83a：2．32)％。初步证明了受体骨髓源干细胞能够在移植肝脏内生长分化、发生替代。在前期实验中总的移植细胞替代率要高于甲胎蛋白、白蛋白免疫组化双阳性移植细胞百分率。提示除了向肝样细胞分化以外可能同时发生了向其他组织细胞的分化。同时在常规病理切片中可见汇管区明显的血管

5、增生，是否出现了向血管内皮细胞分化呢?骨髓中存在内皮祖细胞，是一种能够分化为血管内皮的前体细胞，其可以由骨髓动员到外周血，分化为成熟的内皮细胞，并整合到血管损伤部位，参与血管的修复。Gohra[”1等曾经深入观察了同种腹主动脉移植后其内皮变化情况，他发现移植的腹主动脉由于缺血和再灌注损伤其内皮部分缺损，移植后供者内皮首先出现增殖，由于同种的排斥反应，移植血管自身内皮又逐渐脱落，最终受者内皮增殖并覆盖移植血管腔表面。在肝移植中同样存在缺血再灌注损伤和免疫排斥反应对于血管内皮的损伤。因为血管内皮细胞是血液与组

6、织间的重要屏障，是器官移植后供、受者细胞间最早接触的场所，最早被免疫系统识别。血管内皮细胞具备独特的生物学功能：有免疫原性，有抗原提呈功能，其同白细胞相互作用在移植排斥反应中有重要作用。如果在此条件下骨髓源血管祖细胞早期参与血管内皮的修复，受体来源血管内皮细胞替代供肝组织内的血管内皮细胞将对减轻排斥反应改善供肝功能有着重要作用。骨髓中的EPCs(血管内皮祖细胞)表达CD34、CDl33和VEGF-2，(鼠的对应抗原称fetalliverkinase一1，flk一1)而不表达VE．cadherin和vWF。

7、EPCs释放入血后CDl33标志逐渐消失，CD34表达下调，并出现表达VE．cadherin、vWF、CD31、eNOS等成熟血管内皮标志。CDl33表达消失的同时出现vWF，可能为EPCs分化II硕士学位论文为成熟内皮的标志⋯1。依据这些特点我们实验设计拟建立双袖套法大鼠原位肝移植模型，将受体特异性骨髓干细胞经门静脉途径植入移植肝脏，观察术后早期的病理表现，利用Sry原位杂交结合vWF免疫组化双染观察特异性骨髓干细胞是否可在肝内转化为血管内皮细胞，以期从中获得提示和相关的证据。目的：研究受体特异性骨髓干

8、细胞在大鼠移植肝中向血管内皮细胞的分化情况及对其大鼠原位肝脏移植早期排斥反应的影响。方法：用双袖套法建立大鼠原位肝移植模型，供体为雌性Wistar大鼠，受体为雌性SD大鼠。受鼠随机分为对照组和实验组，对照组6只，实验组12只。其中对照组仅行原位肝移植，实验组在原位肝移植术后关腹前经门静脉注射雄性SD大鼠骨髓单个核细胞O．5ml(1x107个／m1)。受体大鼠均给予亚治疗剂量的环孢素A(cyclosporineA，CsA)0．2