肠复康抗人大肠癌血管生成的实验分析

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1、射，SPF条件下饲养，所有饮用水、饲料及笼舆均经无菌消毒处理。特肿瘤长至长径O。5～1．0era，断颈处死，无菌黧离癌体，浸入生理虢水中，剪成1．0ram友右直径碎块，用16号旗管针予40只裸鼠腹背侧部备移植2～3块。2．3实验分鲑及翁嚣裸鼠接种后第6天，随机分成如下5组并给药；空臼对照缎：生理盐水O．2ml，灌胃。阳性对照维：苏拉明15mg／Kg，腹腔注射。肠复康低荆殿组：肠复康4．489／Kg，灌胃。肠复康中帮量组：肠复瘴8．969／Kg，灌霉。肠复康高剂匿组：肠复康17．929／Kg，灌胃a本实验中弱复康鬣、中、

2、离给药量各摇当于60Kg体重溅入临床用药量的5倍、lO倍、20倍。各剂量均用生理盐水鬻已成O．2ml使用，每天给药1次，每给药6天后停1灭，共8周。2．4指标检裾2．4．1瘤黛、抑瘤率移植分组焉第∞天(霹末次给药后第2天)，将裸鬣断颈处死，到离瘸体后称重(W)，计算抑瘤率(I)[131：》(对爨组W一治疗缓W)，对照绲W×lOO％2．4．2肿瘤组织MVD和VEGF、endostatin、MMP．2表达检测。瘤体取下后立即甭10％中性福尔马林固定48小耩系歹lj脱水，石蜡包埋，常规切片3～5um，分别行CD34、VEGF

3、、endostatin、MMP-2的免疫组化染色。具体操作按各试剂盒说明进彳亍，主受染色程序如下：1)蜡切片脱蜡至承，用PBS液(O．0tmol／L。PH7．4)薄冼3次×5rain，2)3％H202宝温孵育10分钟，敬酒除肉源性过氧化物酶的，3)蒸馏水冲洗，PBS掇泡5分钟。4)10％瓣歪鬻由羊盎清(PBS稀释)封淹，室滠孵育lO镑。德去立渍，勿洗，滴加1：100比例稀释的一抗，37。C孵宵小时。5)PBS；串洗，5势锋×3次。6)滴加第二代生物素标记二抗工作液，37℃戏室温孵育分锌。7)PBS滓浇，5分钟×3次。8

4、)滴嬲第二代辣根酶糠记链秣劈是索工作液，37*(2孵育分锋。9)PBS冲洗，5分钟)<3次。10)显鬯裁萎毪(DAB或AEe)。11)自来水充分冲洗，苏木精复染，封片。MVD<镞盎警密度)硷溺接Wcidner等‘鞲’蔽滢蘸穷法迸符：先焉100倍光键扫视憋个切片，寻找衄管离镪度区，即“热点”，再在200倍光镜下诗数3个撬辫被CD34抗体染成稼黄色的盘管环(祭)数蹰，取箕j个视辩平均数。VEGF及endostatin主要在肿瘤细胞胞浆中表达，MMP-2主要农肿瘤基质缨嶷鹣缒浆肉表达，均呈稼黄垂簸粒。惠攀显徽镳下燕察备染色媾

5、嚣，默Mias-2000图敷分析系统采絮图像并检测处理结果。2．5黧蘩援蔫撼鬟及寒义强161颟积：怒形态定燕分析中常用贻参数。裁匿的蕊积等乎藩在截蕊盎蛇像素熹计数乘戳每个铡试像素点所我鞭的测试面积。积分光密度(IOD)：建冠一照鼹条传下，不翅缝织缁艇藏分竣缨鼹化学反鹿的产物藏染料染色的结果所吸收或透过光的数值称为光密度。IOD魑指被铡麓覆截疆嫒囊先密庭购礁分攘，表示啜毙耪凄鹃慧食爨。IOD德越大，说明测定物成的量或染色反艨后颜甑越深，数量越寥。2．6统计方法数撂鹩戳x圭s表示。鹱育撩椽分辑经$AS较箨统计笼毽。缝阉魄较

6、、两两比较分别采用ANOVA及SNK法。回归分析采用REG浃。3．实验鳙莱3．1一敷获漫鬟囊裸鼠接种2周内，癌体基本成椭圆澎，2周厢逐渐不规则，，表面凹凸不平。空鑫缀瘫傣垒长鞍抉，CFK舞裁譬筑生长最慢。褥嬲在器裁，空鑫绦撩黼显得尤为消度。饮食、活动方麟备组冤明显差舜，仅镣次CFK灌胃lh内，撩疆纛挤少动，箕嚣莰笺正常。察验过獠中，豫窑自缎和苏控媚组外，各组均意一只棵鼠因攥胃不当死亡。3,2备组用萄对人太肠癌瓣l审癯作用觉寝1。淡1备缀撰鼠咎植瘸漤重及撵癌率毙较组别鼠数(只)瘤重(g)抑瘸率(％)空是黠爨缓81．63_

7、_+o．48苏拉明对照组81一14±o·40“30·1肠复康低爨缎7t．09：ko·39“33tl肠复康中激组70,87_+0·184。46-6豚复康高爨维70．55_+0。lj她“‘66．3泣：6与空自组眈较P<0．05；“与空自组比较P<0．01；“6埘空白组比较P<0．001；‘与苏控骥怼照缀兜较P<0。01。如表1所示，肠复康抑瘤作用与剂量星正相燕趋势。其低齐0景组抑瘸率33。l毵，癌薰枣予窑垂缀(P啪．05)，毫裁耋缓撺瘩率遮663％，癌羹露著小于空白缀(P<0，001)。苏拉明缀瘤重也明显小于空豳组(p《O

8、。05)，但与肠复藤麓裁量缀眈鞍，瘸重较大(P<0．01)。稳示肠鬣康对入太肠绱疑有患好的抑制作用共星量效依蔟关絮。3．3备姐鞠药对人大肠癌绑胞MVD的澎响觅褒2．表2各组裸鼠移植瘤MVD比较注：“与空爨维比较P<0。01；“6奄空白缓魄较P<0．001；’与苏羧襞组比较P>0．05。MVD楚嚣妻蓼耱瘗壹警生成译徐较为公谈戆据标，