c57bl%2f6小鼠肝脏微粒体膜蛋白表达谱的的研究

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1、LanzhouUniversity兰州大学硕l：研究生学位论文5原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。除文中已经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：蔓壑日期：盖型：．上：乙』，兰州人学硕上研究生学位论文关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属

2、兰州大学。本人完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为兰州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：堑蕴．导师签名：日期：蛐．丫LanzhouUniversity兰州人学硕上研究生学位论文中文摘要内质网(endoplasmicreticulum，ER)被认为是贯

3、穿胞浆的一种生物膜性细胞器，根据其是否结合核糖体将其分为粗面内质网(roughendoplasmicreticulum，rER)、光面内质网(smoothendoplasmiereticulam，sER)。内质网具有参与蛋白质合成、转运，糖原分解和脂类、胆固醇合成等功能。在肝脏中，内质网还参与内源的疏水代谢物和异源物质的生物转化。研究发现，与ER相关的功能蛋白质大多为膜结合蛋白质，内质网功能的失调能引起细胞功能异常和一系列疾病。因此，为了深入了解内质网在肝脏中所发挥的重要功能，本研究采用蛋白质组学方法系统发掘C57BL／6小鼠肝脏微粒体膜蛋白信息。对

4、生物系统的蛋白质组学研究主要利用凝胶电泳结合肽指纹法进行鉴定。目前，广泛应用的2-DE技术对蛋白质分离效果很好，在一块胶上可分离10000蛋白质，但其最大缺点是对膜蛋白质的分离效果很差，特别是在多蛋白质复合体、亚细胞器或者膜蛋白质组的研究中将是致命的。因此，本研究通过离心法建立了小鼠肝脏微粒体提取的平台，采用免疫印迹和电镜的方式观测微粒体提纯的程度，最后采用一维凝胶电泳和液相色谱质谱联用技术鉴定疏水部分，本研究总共获得548个蛋白。根据SWISS．PROT数据库注释，明确定位于肝脏的有143个蛋白质，其中明确注释为ER的有39个蛋白质，未知定位的有3

5、5个蛋白质；注释为其他组织的有75个蛋白质，其中注释为ER的有7个，未知定位的有39个；SWISS．PROT数据库未明确表达组织的有331个蛋白质，其中明确为ER的有66个蛋白质，未知定位的有131个蛋白质，包括lO新蛋白质。利用swiss．prot在线软件整体上对本研究所获蛋白基本理化性质进行分析。然后利用GeneOntology(http：／／www．ebi．ac．uk／ego／)开发的软件GOfact工具对小鼠肝脏内质网表达谱进行功能以及定位信息进行分析，功能上认为小鼠肝脏微粒体正常发挥功能且主要为合成膜蛋白和外分泌蛋白，结构域分析验证了此结论

6、；定位上，胞浆蛋白质污染基本去除，说明微粒体膜的提取效果好。作为蛋白质合成的主要细胞器，内质网一方面选择性运出分泌蛋白和膜蛋白，另一方面保留内质网定位蛋白以维持其结构和功能。内质网保持驻留蛋白主LanzhouUniversity兰州大学硕{-．自Jf究生学位论文要通过两种方式完成：阻止其进入运输小泡而停留于内质网中；内质网蛋白进入转运小泡后重新运回内质网。这些内质网蛋白的定位是通过周密调控的。研究发现在微粒体膜蛋白质中有156个蛋白约28．47％具有已确定的内质网定位信号。与已有的微粒体相关蛋白质组数据比较发现异物代谢酶P450家族在rER和sER中

7、分布无明显变化，同时大鼠与小鼠中P450家族蛋白质在序列上有较大变化。核糖体蛋白质在序列上I：1",P450家族蛋白质在进化上更保守，sER与rER相比核糖体数目变化不大，但是蛋白质丰度变化明显。总之，通过研究得到高度富集的微粒体膜，在此基础上建立了小鼠肝脏微粒体膜蛋白质表达谱，确定了548个微粒体蛋白质，并利用生物信息学手段对其进行了生物学解读以及与已有的微粒体相关蛋白质组数据进行比较分析。关键词：肝脏；微粒体；质谱：蛋白质组；定位2—La—nz—houUniv—ersity兰州火学硕t：rO[究生学位论文AbstractTheERisrecogn

8、izedaSallextensivemembraneboundorganellecomposedofanet