2周和26周gk基因敲除小鼠肝脏基因表达差异的研究

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1、内蒙古医学院硕士学位论文2周和26周GK基因敲除小鼠肝脏基因表达差异的研究姓名：高辉申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：刘晓雷20070501中英文缩略语表英文缩写英文名称中文名称AmpAmpicillin氨苄青霉素bpBasepair碱基对ddH20Doubledistilledwater双蒸水DEPCDiethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯明广rDitlliddlreitol二硫苏糖醇EBEthldiumBromide溴化乙锭EDTAEthylenediaminetetraacerieacid乙二胺四乙酸InsRInsulinreceptor胰岛素受体GAPDHGly

2、ceraldehydphosphatedehydrogen∞e磷酸甘油醛脱氢酶G一6一P-12HGlⅦ：o

3、陀一6一phosphatedehyd贰堰a豫辩葡萄糖一6一霹犍睃且i乏酾GKGhcokinase葡萄糖激酶IPTG；sopropy十。训唧⋯ae量冀邓曲碱代半MOPS3一(morpholino)propallesulfonicacid3一吗啉基丙磺酸NIDDMn∞一insulin—dependentdiabetesmellitus非胰岛紊依赖性糖尿PCRpoIym目a∞chainreaction聚合式酶链反应MODY。turi哆一—setdjabetaof“y叫ng秦碧年发病的成年

4、型糖PAGEPolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠SSHSuppressionSubtractiveHybridization抑制性消减杂交TEMEDTetramethylethylenediamlne四甲基乙二胺x一列85r—losB舢lcle叫一凸‰。3叫蒯打旷旷一一嚣：j蒜；吲％p—u一1-fLⅧH内蒙古医学院学位论文原创性声明郑重声明：本人所呈交的学位论文是在导师指导下，独立进行研究所取得的研究成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文内容不包含其他个人或集体已经公开发表或撰

5、写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人学位论文与资料若有不实，愿意承担一切相关的法律责任。论文作者签名秒1年6窍；日学位论文版权使用授权书本人完全了解学院有关保留、使用学位论文的规定，同意学院保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版。学院享有发表、复制、查阅、借阅及申请专利等权利。可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。同时本人保证：毕业后发表、使用学位论文以及结合学位论文研究课题再撰写的文章，作者署名单位一律为内蒙古医学院。论文作者签名鳟J妒-1年《黾e黾指导教师签名盔!堕垒多、口]年以日中文摘要目的旨在通过进一步研

6、究肝脏特异性GK基因敲除小鼠模型，考察不同年龄GK基因敲除小鼠肝脏基因表达的差异。方法本课题组自行构建肝脏特异性GK基因敲除小鼠模型，测定2周、4周、7周和26周模型鼠的空腹血糖值、葡萄糖耐量、血清胰岛素、葡萄糖激酶活性、葡萄糖激酶和胰岛素受体的蛋白表达，选取2周和26周两组血糖值明显差异的模型动物，通过抑制性消减杂交(SuppressionSubtractiveHybridization，SSH)的方法分析模型鼠肝脏基因表达的差异。结果实验结果表明2周模型鼠的空腹血糖值与其他各组有显著性差，空腹血糖值随年龄增加而升高，糖耐量异常，血清胰岛素水平升高，葡萄糖激酶活性升高，Westernb

7、lot结果证实模型鼠肝组织中葡萄糖激酶蛋白表达随着年龄增加有升高的趋势，但没有显著性差异，胰岛素受体表达随着小鼠年龄增加显著性增加。通过SSH的方法，初步找到80个在26周模型鼠表达而在2周模型鼠不表达或低表达的基因，鉴定克隆并测序。结论构建的肝脏特异性GK基因敲除小鼠模型基因表达特征稳定，符合糖尿病检测标准。随着年龄的增加，模型小鼠的生物学和分子生物学指标有所变化。在2周和26周两组模型小鼠中找到基因表达的差异片段，但该基因是否与2型糖尿病发病机制有关，还有待于进一步的研究，同时该基因是否可以成为降糖药物的作用新靶点也还需进一步的实验证实。关键词抑制性消减杂交葡萄糖激酶基因敲除Thei

8、nvestigationoflivergeneexpressiondifferenceat2weeksand26weeksGKgeneknockoutmiceABSTRACTObjectiveToexaminechar培esingeneexpressioninliver—specificGKknockoutmiceatdifferentagesgetthedifferencesinlivergeneexpressionofGKgen