GBT5413.27-1997-婴幼儿配方食品和乳粉DHA、EPA的测定.pdf

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1、GB/'r5413.27-1997前言在婴幼儿配方食品中添加DHA,EPA是近两年的科技成果，对其含量的检测方法尚在探索阶段。本标准给出的方法是在参考了大量国内外文献的基础上，经反复实验、验证而确定的，具有操作简便、快速、灵敏度高的特点。本系列标准从实施之日起，代替GB5413-55,本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位:国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢(中国)投资服务有限公司。本标准主要起草人:刘波、杨金宝、王芸。中华人民共和国国家标

2、准婴幼儿配方食品和乳粉GB/T5413.27-1997DHA、EPA的测定代替GB5413-85Milkpowderandformulafoodsforinfantandyoungchildren-DeterminationofDHAandEPAcontents，范围本标准规定了用气相色谱法测定DHA和EPA的方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中DHA和EPA含量的测定。2方法提要抽提出样品内的脂肪，经甲基化反应后，以气相色谱火焰离子化检侧器定量测定样品中的DHA和EPA的含量。3试剂所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级

3、水。3.1高峰氏淀粉酶(Taka-Diastase).3.2A水:体积分数<25%03.3乙醇:体积分数>_95%o34乙醚。3.5石油醚:沸程，30-60'C。3.6正己烷:色谱纯。3.7氢氧化钾的甲醇溶液:c(KOH)为4mol/L，使用无水甲醇。3.8标准溶液3.8.1标准贮备液:准确称取1.Oog标准鱼油(EPA163.9mg/g,DHA135.30mg/g)，用正己烷溶解并定容至5OmL(EPA的浓度为3.2678mg/ml=DHA的浓度为2.7060mg/mL)，冷冻保存。3.8.2标准工作液:取标准贮备液1.OOmL，用正己烷烯释并定容至IOmL(E

4、PA的浓度为0.3268mg/mL,DHA的浓度为。.2706mg/mL)，使用前配制，以防止溶剂挥发而使浓度改变。4仪器和玻玻器皿常用实验室仪器及:4门毛氏抽脂瓶。4.2离心机。4.3水浴锅。4.4振摇器。45气相色谱仪。国家技术监督局1997一05一28批准1998一09一01实施Gs/T5413.27-19974.6火焰离子化检测器。4.7色1爵柱:2m,10%EGSS,GAS-CHROMQM/100^-200目，不锈钢柱。5操作步骏5门ff}W,处理5.1.1含淀粉样品准确称取1.000og样品放人毛氏抽脂瓶中，加入。.1gTaka淀粉酶，再加入lOmL4

5、5-50C的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45'C烘箱内30min，取出冷却室温。5.1.2不含淀粉样品准确称取样品1.000og.放入毛氏抽脂瓶(4.1)中，用lOmL65℃的热水溶解，振摇，使样品完全分散，水冷至室温。5.2测定液的制备5.2.1于上述样品溶液中加入2mI体积分数为25%的氨水(3.2),置于“℃水浴(3-3)中15min，取出，轻摇，冷至室温。5.2.2加入10mL乙醇(3.3),混匀。加入25mL乙醚(3.4)，塞上塞子振摇lmin。加入25mL石油醚(3.5),塞上塞子振摇lmin。再加入25mL石油醚，塞上塞子振摇

6、lmin。离心或静止，使醚层、水层分开有机层转入烧瓶中。第二次提取加入的试剂为5mL乙醇,15ml乙醚,15mL石油醚，操作同前。第三次提取不加乙醉，只用15mL乙醚和15mL石油醚，如上操作。5.2.3把提取的醚液合并，减压浓缩至近干，用正己烷溶解残留物并定容至lOmL，摇匀。准确吸取2mL此液于10mL带盖离心管中，加人。.2mL氢氧化钾的甲醇溶液(3-7)，振摇lmin以上，放置lOmin(甲基化反应)。如果有机层混浊，可离心使之澄清。此有机层即为样品待测液。5.3测定5.3，测定条件a)进样器温度:230"C;b)检测器FID温度:250'C;。)进样体积

7、:2.OpL;d)灵敏度:10-1;e)衰减:Saf)氮气流速:50mL/mina氮气流速:25mL/min;空气流速:300mL/min=g)柱温:1900C,5.3.2定性测定根据保留时间定性。改变色谱条件，如柱温度、载气流速，使标准组分EPA和DHA的保留时间发生改变。如果样品中的某个峰随标准品中的某个峰的保留时间有同样的改变，即证明样品中含有与标样相同的某个组分。5.3.3定量测定外标定量法。注射一定量的标准工作液进入气相色谱仪，得到EPA和DHA的峰面积A，注射等体积的样品待测液进人色谱仪，得到样品中EPA和DHA的峰面积B,o6分析结果的衰述样品中EP

8、A或DHA