rho激酶抑制剂y-27632降眼压机制的实验研究

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1、声明尸明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指下取得的，论文成果归四川大学所有，特此声明。论文作者签名：指导教师签名：日期；函，＼修17杈乃办柙、}·t四川大学临床医学博士专业学位论文Rh0激酶抑制剂Y-27632降眼压机制的实验研究研究生：刘娅利导师：陈晓明教授中文

2、摘要目的：研究糖皮质激素(地塞米松)和Rho激酶抑制剂Y-27632对体外培养的人小梁细胞及细胞骨架的影响．采用局部滴用糖皮质激素联合结膜下注射曲安耐德建立糖皮质激素性猫高眼压模型．观察Y-27632对猫糖皮质激素性高眼压的降眼压效果．探讨激素性青光眼的发病机制以及Y-27632的降眼压机制。方法：1．采用第6代人小梁细胞，培养至细胞融合为稳定的内皮细胞样形态，加入地塞米松(200mM)继续培养2周，然后用10州Y-27632分别处理细胞3小时和24小时，观察细胞形态以及肌动蛋白及粘着斑蛋白的变化。成年家猫被训练接受局部滴眼药，并适应在表面麻醉下进行眼压溯量．采用TONO-PE

3、NXL眼压计，连续3天每天测量双眼眼压，取平均值作为基础眼压。然后采用O．5％地塞米松滴右眼，3次，天，局部麻醉下结膜下注射3mg曲安耐德，每周1次。左眼仅滴生理盐水作为对照。使用糖皮质激素后每周测量1次眼压，并观察眼的局部反应和全身反应。8周后，采集猫小梁网标本送电镜检查。四Jll大学临床医学博士专业学位论文将眼压升高的猫纳入进一步降眼压研究，取高眼压眼分成3组分别滴30mM，10mM浓度的Y-27632和对照液PBS。用微量加样器将Y-27632或PBS点到角膜中央．每次5ul，间隔30see，共点3次．用TONO．PENXL眼压计测量滴眼后O．5、1、3、6、9、24小时

4、眼压。结果；I．与正常培养的人小梁细胞比较，地塞米松处理的小粱细胞表现肌动蛋白增加，形成肌动蛋白交联网，同时粘着斑蛋白表达增多．用Y-27632处理后，小梁细胞回缩交圆，肌动蛋白降解或减少，粘着斑明显减少或趋于消失．中止Y-27632作用后，肌动蛋白及粘着斑蛋白恢复，表明Y之7632的作用有可逆性．2．32只实验猫的平均基础眼压为18．64：圭2．42mmHg。在接受糖皮质激素的2s眼中，25跟在用药第2周眼压开始丹高，到第6周时达到峰值．然后保持一个相对高平台。从第2周开始，实验组眼压升高峰值与同期对照组眼压比较，平均差值达7．38mmHg(P<0．05)二在激素诱导的高眼压

5、眼，电镜检查，小梁细胞核异形性增大，细胞闻质内可见微绒毛样结构，租面内质网扩张，细胞间基质增多。；．Y-27632对猫糖皮质激素性高眼压有明显的降眼压效果。与空白对照组比较，Y-27632作用于激素诱导的猫高眼压眼半小时后眼压即开始显著下降(P(O．05)．用药l小时后眼压下降到最低点。浓度为30mM的Y-27632降眼压效果在用药后0．5～3小时之间明显，眼压平均最大下降幅度为6．13mmHg，浓度为10mM的3(-27632降眼压效果在用药后0．5～l小时之问明显，平均最大下降幅度为2四Jl}大学临床医学博士专业学位论文结论：1．在地塞米松作用下，人小梁细胞肌动蛋白细胞骨架

6、形成肌动蛋白交联网结构，粘着斑蛋白表达增多。推测糖皮质激素诱导小梁细胞骨架改变是激素性青光眼眼压升高的原因。Rho激酶抑制剂Y-．27632可有效降解地塞米松所引起的小梁细胞骨架改变，提示Y-27632可能降低糖皮质激素性高眼压。2．家猫对眼局部应用糖皮质激素反应率高，89％实验眼发生了糖皮质激素诱导的高眼压。糖皮质激素诱导的猫高眼压模型对了解蓿皮质激素性青光眼的发病机制具有重要意义，也可用于寻找和筛选有效的降眼压药物。；．Rho激酶挪截帮Y-27632能降低猫糖皮质激素性高眼压，降眼压的持续时阅和降压幅度呈剂量依赖性。Rho激酶抑制剂Y-27632是一种有潜力的抗青光眼药物，

7、其降眼压机制可能是通过改变小梁细胞骨架发挥作用。关键词：Rho激酶抑制剂；Y-27632；细胞骨架；糖皮质激素性高眼压；动物模型；眼压四川大学临床医学博士专业学位论文TheexperimentalstudyofRhokinaseinhibitorY-27632onthemechanismofloweringtheintraocularpressueABS’IRACTPURPOSE：Toinvestigatetherolesofglucocorticoid(Dex蛐ne)DE：X)andRho