ezrin与胰腺癌发生、侵袭及转移关系的探讨

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1、中国医学科学院中国协和医科大学博士学位论文中文摘要胰腺癌是预后最差、死亡率最高的恶性肿瘤之一。由于发病部位的特殊性及症状的隐匿性，很难进行早期诊断，绝大多数病例在诊断时己处于晚期。胰腺癌极强的侵袭和转移能力与其预后差直接相关。手术切除是目前获得治愈的唯一手段，但只有不到20％的患者适于手术切除，而不能手术的患者平均生存时间少于六个月。胰腺癌预后差的原因之一是常在出现临床症状和影像学技术改变之前就有微转移灶形成。研究胰腺癌的这种高度恶性生长扩散方式的机制，从而找到治疗胰腺癌的新方法，是目前医学研究的迫切任务之一。近年文献报道，e商n的高表达可以促进多种肿瘤的转移，

2、因此e撕n可能是某些肿瘤基因治疗的潜在靶点。越来越多的研究表明e撕n在肿瘤细胞中的生物学行为中发挥着重要的作用。通过干预ezrin表达探讨e面n对胰腺癌细胞生物学行为的影响，目前尚未有研究报道。本研究旨在利用RNA干扰技术和基因过表达技术对胰腺癌细胞系MiaPaCa．2细胞中e蕊n的表达进行干预，进而探讨ezrin对胰腺癌生物学行为的影响。1．利用I州A干扰技术研究ezdn在胰腺癌细胞的表达抑制后对细胞生物学行为的影响：成功确立了e面n的有效干扰位点，构建干扰载体，并挑选出稳定干扰克隆。发现ezrin表达抑制对胰腺癌的增殖和细胞周期没有明显的影响，但e撕n表达抑

3、制可使胰腺癌细胞的细胞突起和表面微绒毛明显减少，在软琼脂内形成克隆数明显减少，细胞迁移至TranswellCh锄bers下室的数量明显下降，侵袭至MatrigelInvasionChambers下室的细胞数量明显减少。2．利用e面n表达载体对胰腺癌细胞MiaPaCa-2进行转染，筛选获得稳定过表达克隆。发现e撕n过表达对胰腺癌细胞的增殖和细胞周期没有明显的影响，但ezrin过表达可使胰腺癌细胞的细胞突起和微绒毛明显增多，在软琼脂内形成的克隆数明显增多，细胞迁移至T啪swellCh锄bers下室的数量增加，侵袭至M撕gelhⅣ撕onCh锄bers下室的细胞增多。3

4、．利用明胶酶谱分析发现，ez血l过表达可引起基质金属蛋白酶MMP．9中国医学科学院中国协和医科大学博士学位论文的表达，但e撕n敲减表达对明胶酶表达的影响并不明显；对心及Erkl／2信号通路的分析表明，ezdn的过表达可使Erkl／2磷酸化水平降低，而ez—n敲减表达对Erkl／2磷酸化水平的影响不明显，e撕n的表达变化对脂的磷酸化水平，Akt总蛋白和Erkl／2总蛋白影响不明显，此结果提示e蕊n可能通过下调Erkl／2的磷酸化水平，进而导致肌动蛋白细胞骨架的重现从而引起细胞运动能力的增加，进而导致细胞侵袭能力的改变；而e嘶n表达下调引起细胞运动和侵袭能力的下降可

5、能还通过其它机制。综上所述，本研究发现e加n的表达变化可引起细胞伪足及表面微绒毛数量、细胞运动、侵袭能力的改变和细胞非锚定依赖性的生长能力的改变，表明e撕n蛋白在这些细胞生物学行为方面发挥着重要的作用。Ezrin引起肿瘤细胞侵袭和运动能力的变化部分可能是通过影响Erkl／2磷酸化水平引起肌动蛋白细胞骨架的重构，继而导致细胞运动能力的改变引起的，部分可能是通过引起MMP的表达变化导致其侵袭能力的改变所致，具体的机制还需要进一步研究。Ezrin在胰腺癌的形态学、非锚定依赖性的生长、运动以及侵袭转移过程中发挥着重要的作用。因此，针对ezrin表达的干预可能会使胰腺癌肿

6、瘤细胞侵袭和转移能力下降，有希望成为胰腺癌侵袭转移的一个新的治疗靶点，从而为胰腺癌的治疗提供了一条新的途径。关键词e州n细胞骨架连接蛋白胰腺癌侵袭转移基因治疗6中国医学科学院中国协和医科大学博士学位论文ABSTRACTPancreaticductalad锄ocardnomaistheei曲thleadingcauseofc锄cermortalityinChinaalldthefourthinUnitedStates．T1leincidenceofPancreaticductalademocarcinomaisincreasing．Sof打neitheranear

7、lydiagnosisnoratherapeuticstrategyforadVaIlcedlesionshasbeeIldeVelopedyet．Thedeathtoincidenceratioofp锄creaticductalcarcinomaisapproximatetoO．98-O．993．TheoVerall5-yearsurViValrateofpancreaticcarcinomaislesstll锄5％，whichisla唱elyduetothedi伍cult)，inearlydia印osis．Moreth锄85％ofpatientshaVeth

8、ediseaseexte