igfbp2调节胰腺癌转移及侵袭的机制及其临床意义

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1、分类号：R735学校代码：10062密级：学号：2012601054博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：IGFBP2调节胰腺癌转移及侵袭的机制及其临床意义TITLEMechanismandclinicalsignificanceofIGFBP2inregulationofinvasionandmetastasisofpancreaticcancer一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：高松指导教师：郝继辉教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R735学校代码：10062密级：学号：2012601054学位类别：科学学位专业学位学科门类：10021

2、4博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：IGFBP2调节胰腺癌转移及侵袭的机制及其临床意义TITLEMechanismandclinicalsignificanceofIGFBP2inregulationofinvasionandmetastasisofpancreaticcancer一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：高松指导教师：郝继辉教授导师组成员：孙燕任贺天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个

3、人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密√。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学博士学位论文中文摘要背景和目的：检测IGFB

4、P2蛋白在胰腺癌患者血清和肿瘤组织中的表达状况，结合患者临床病理资料评估IGFBP2蛋白作为胰腺癌诊断和预后判读标记物的可能性；观察IGFBP2对胰腺癌细胞迁移侵袭等生物学行为的影响，探讨IGFBP2蛋白影响胰腺癌细胞侵袭转移的具体机制。方法：1.分别收集健康志愿者，慢性胰腺炎患者和胰腺癌患者治疗前的血清标本，使用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中IGFBP2的表达水平，分析IGFBP2蛋白在各队列中的差异性表达，再结合临床病理参数和ROC曲线评估比较IGFBP2与CA19-9在不同亚组患者中的表达情况和诊断效力，对病例资料进行随访观察，根据不同IGFBP2蛋白表达水平作生存分析；再对

5、肿瘤组织进行IGFBP2蛋白免疫组化染色，并结合临床病理资料分析肿瘤组织中IGFBP2与临床病理参数之间的关系并根据不同IGFBP2蛋白表达水平作生存分析；2.构建IGFBP2过表达质粒和干扰RNA、观察不同IGFBP2表达水平对胰腺癌细胞株形态和生物学行为的影响，利用WesternBlot和免疫荧光技术检测干扰与过表达IGFBP2后胰腺癌细胞EMT关键基因在蛋白水平的表达以及细胞定位情况；使用IGFBP2过表达稳转细胞构建胰腺癌原位裸鼠模型，评估IGFBP2对胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响；3.使用cDNA微阵列技术对比IGFBP2稳定过表达胰腺癌细胞和野生型胰腺癌细胞的基因表达差异，并通

6、过信号通路分析软件IPA预测可能被激活的信号通路（本试验发现NF-κB被激活）；分别提取细胞核和细胞浆蛋白，WesternBlot检测IGFBP2过表达和下调后NF-κB激活情况并使用免疫荧光进行细胞定位检测，在临床样本组织切片中进行IGFBP2，NF-κB的p65亚基和EMT重要基因进行免疫组化染色，观察各指标表达是否具有相关性。最后联合应用IGFBP2重组蛋白、各信号通路抑制剂，基因修饰MEF细胞，PTEN突变质粒及双荧光素酶实验研究IGFBP2激活NF-κB的可能机制。I天津医科大学博士学位论文结果：1.ELISA检测发现IGFBP2在胰腺癌中（435.7±234.2ng/ml）较慢

7、性胰腺炎（233.0±59.80ng/ml）和健康人（289.9±148.2ng/ml）明显表达升高（P值均<0.05），并且该差异性在对年龄和性别进行校准后依然存在。IGFBP2根据患者临床资料进行亚组分析发现，IGFBP2较CA19-9在伴发糖尿病情况，淋巴结转移和神经侵犯各亚组有明显差异，ROC曲线显示IGFBP2联合CA19-9较二者单独使用可以明显提高胰腺癌的诊断率（AUC值0.921），且IGFBP2较CA1