【硕士论文】葛根美白活性物质的分离提取及在化妆品中的应用.pdf

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1、捅费辅孽●●1·●1～本课题主要对中草药葛根中含有的对皮肤具有美白活性的物质进行了研究，包括葛根有效成分的提取，提取工艺的优化，和对美白活性成分进行分离纯化，并进一步探讨了葛根提取物对酪氨酸酶抑制作用的类型和机理，最后对葛根提取物作了一些应用研究。对葛根，金银花，六月雪和柿叶四种常用中草药分别通过水和乙醇回流提取、浓缩、低温烘干。采用生化酶法测定各提取物的美白活性。分别测定它们的水提取物和乙醇提取物的美白活性，得到葛根的水提物和乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制作用强于其它几种中草药的提取物。采用单因素实验法，考察了缓冲溶液的pH值、L，酪氨酸的量、酪氨酸酶的量、恒温时间和反应

2、时间这五个因素对美白功效实验体系的影响，得到最佳实验条件是：pH值为6．85、L．酪氨酸溶液的量为1．0mL、酪氨酸酶的量为0．40mL、恒温时间为10min、反应时间为5min。采用三因素四水平正交试验法对葛根乙醇提物的提取条件进行优化，得到最佳工艺条件为：乙醇浓度为75％、回流时间4h、料液比1：8、提取次数2次。并绘制了葛根素标准品的标准曲线，测定了正交实验中9次实验得到的葛根提取物的黄酮含量。将葛根的乙醇提取物通过不同极性的溶剂萃取，浓缩后得粗提物，对各粗提物进行酪氨酸酶抑制率的测定，得到葛根的乙酸乙酯萃取物对酪氨酸酶的抑制作用最强。然后用常压硅胶柱层析法对该萃

3、取物作梯度洗脱，用硅胶G薄板进行TLC检测，跟踪沈脱情况，得到A～J共lO个洗脱物，再分别对这些洗脱物进行酪氨酸酶抑制率的测定。从测定结果得到，从葛根中分离得到两个组分B和D对酪氨酸酶的抑制率较高，分别为65．7％和79．2％。对B进行第二次柱层析，得到了对酪氨酸酶抑制竹：用明显的B3，它对酪氨酸酶的抑制率为92．3％。对D组分进行第二次柱层析后，得到对酪氨酸酶抑制作用最强的是D4，它对酪氨酸酶的抑制率达98．5％。对B3和D4进行高效液相色谱、紫外色谱，液质联用色谱检测，并与标准品对比，推断大豆苷元和葛根素分别为中草药葛根中的主要美白成分。研究葛根提取物抑制酪氨酸酶活

4、性的动力学，发现葛根素对酪氨酸酶的抑制类型为非竞争性抑制。将葛根素添加入膏霜中，用0【．熊果苷作阳性对照，通过对15位实验者进行3个月的人体实验，得到添加葛根素的膏霜具有较好的皮肤美白效果。采用滤纸片法测定葛根提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果，得到葛根素对两种菌的抑菌效果影响不明显，而葛根醇提物对大肠杆菌的抑菌效果更明显。关键词：葛根；美自；酪氨酸酶；化妆品；提取；分离；第一章综述第一章综述前言化妆品的使用具有非常悠久的历史，并伴随着人类自身的存在和发展而流传至今IlJ。考古学家们相信，人类自旧石器时代即己开始使用化妆品，这一时期大约自5万年前开始。皮肤美白最

5、早开始于20世纪50年代，当时主要是外用汞制剂。由于其安全性问题，汞制剂在70年代被禁用。此后，人们的美白观念从借助物理性的遮盖美白(如粉饼、粉底和增白粉蜜等)逐渐向黑色素还原的生理性美白转变。美白祛斑化妆品市场近年来日趋活跃，销售快速增长。美白剂作为美白化妆品的功能性原料因此受到极大关注，它的开发与应用研究不断深入。各国对皮肤美白剂作用机理、新的美白剂的开发和美白剂的应用投人了大量的人力、物力，并取得了明显的进展，已有很多新的美白剂被应用到产品当中。近年来，美白护肤品越来越被人们所重视，其安全性和功效性评价自然成为消费者和生产厂家所关注的重点【2】。通过美白护肤品的使

6、用，东方人想要得到白晰、光洁的皮肤，而欧美消费者希望减轻和消除老年斑、黄褐斑等色素沉积。中草药在几千年内N#I-敷的应用中已经积累了许多药效记录，对它们的用量、安全性和副作用也有很多验证，这是任何一个合成化合物无法与之相比的。天然活性物从中草药、动物器官和微生物的天然原料中提取分离，化学结构和生物活性没有改变，而其又有多重效能，药效持久稳定，适用面广，无副作用或副作用很小，因此是顺应回归自然，科学美容、科学护理这一趋势的。并且以天然活性物作为化妆品原料和添加剂的优点是pJ：(1)可大大提高有效活性物的浓度，针对性强，疗效明显，丝毫不在合成药物之下。副作用小，特别适用于预

7、防性的化妆品助剂。(2)在精制和纯化过程中除去了天然原料共有的淀粉、糖分、油脂、色素、蜡等无效成分，这些成分又恰恰是微生物生长的营养物质，便于化妆品防腐。也可以除去残余农药。(3)制品色浅，有利于用入膏霜类化妆品中。(4)提供了可检测的活性物含量指标和方法，以便化妆品的防假和防伪。(5)有利于迸一步的药理研究。我国是中药的发源地，中药、天然产物资源丰富，而且中草药的应用已有几千年的历史，与其它国家相比我们具有得天独厚的优越条件，也给开发和利用美白的天然产物提供宽广的空间。从中草药中提取的有效成分具有独特的功能和疗效，由于它们具有很好的美白