天然抗角蛋白自身抗体在病理性自身免疫中作用及机制的研究

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1、第四军医大学硕士学位论文天然抗角蛋白自身抗体在病理性自身免疫中的作用及机制的研究姓名：郑力强申请学位级别：硕士专业：皮肤病与性病指导教师：刘玉峰20070501独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责

2、任。论文作者签名：日期：保护知识产权声明本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学校可以公布论文的全部或部分内容（含电子版，保密内容除外），可以采用影印，缩印或其他复制手段保存论文。学校有权允许论文被查阅和借阅，并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。论文作者签名：导师签名：日期：第四军医大学硕士学位论文天然抗角蛋白自身抗体在病理性自身免疫中的作用及机制的研究硕士研究生：郑力强导师：刘玉峰教授辅导

3、教师：李巍副教授第四军医大西京医院皮肤科，西安710032中文摘要天然自身抗体(naturalautoantibodies，NAA)是在没有任何抗原免疫的情况下，正常机体产生的针对一种或多种自身抗原的抗体，其广泛存在及其功能意义的阐明表明一种生理性自身免疫机制的存在。因此，目前把自身免疫分为生理性自身免疫和病理性自身免疫。前者是指自身免疫反应在一定限度内，不造成机体损伤和功能障碍，其中NAA是生理性自身免疫的主体，在机体抗感染、免疫调节、肿瘤监视、内环境稳态的维持等方面发挥着积极的作用；后者即自身免疫性疾病（autoimmunedisease,

4、AID），是指自身免疫反应超出了一定的限度，导致了针对自身成分的免疫损伤，各种病理性自身抗体发挥了重要的作用。随着研究的进一步深入，有证据提示机体在一种或几种因素作用下，生理性自身免疫反应可能被诱导发生改变，失去了正常的调控功能，而转变成一种病理状态，造成对机体的损伤；遗传、环境、性别、内分泌等因素在这一过程中可能发挥了重要的作用。NAA在病理性自身免疫中的作用长期以来一直存在争议。由于NAA在-2-第四军医大学硕士学位论文正常机体内广泛存在并具有重要的功能，以往的观点认为其对AID的发生具有保护作用，特别是利用分泌型IgM缺陷小鼠进行的研究提

5、示NAA在清除凋亡细胞、抑制AID的发生中具有重要作用。另一方面，有研究认为NAA也可能因为滴度、亲和力、特异性等的改变参与了自身免疫病的发生，并加速自身免疫病的进程。目前，关于NAA和病理性自身抗体的区别以及NAA在病理性自身免疫中的作用是免疫学及相关学科关注的热点之一。我们利用已建立的天然抗角蛋白自身抗体转基因小鼠(anti-keratinautoantibody，AKautoAb)，对AKautoAb的病理意义进行了初步分析。本研究组对NAA家族之一的AKautoAb进行了多年细致、深入地研究，明确了AKautoAb的诸多特性。在此基础上

6、，应用未免疫小鼠B细胞与骨髓瘤细胞融合，成功筛选到了分泌AKautoAb的杂交瘤3B4；在随后的实验中，发现3B4由未突变的胚系基因编码，具有广泛的多反应性，符合NAA的特性；通过克隆AKautoAb的可变区基因构建了转基因（Tg）小鼠，为进一步研究NAA的产生机制、功能意义等问题提供了良好的实验平台。我们共获得了3系具有较高血清AKautoAb滴度的Tg小鼠，每系均具有相似的表型。本研究对常规饲养环境下39系20周龄以上小鼠的表型变化进行了系统而全面的分析，为阐明NAA可能的病理意义进行积极的探索。一、常规环境下AKautoAb重链Tg小鼠的

7、表型分析1．AKautoAbTg小鼠基因型的鉴定、传代、筛选和维持根据本研究小组前期实验所设计的两对引物对小鼠基因型进行鉴定。第一对引物应该扩增出460bp条带；而第二对引物应该扩增出200bp条带。实验证明第二对引物特异性较强。ELISA法检测小鼠血清中的抗角蛋白IgM滴度和总IgM滴度，最终选择了抗角蛋白IgM水平显著增高的39系转基因小鼠进行进一步研究。-3-第四军医大学硕士学位论文2．AKautoAbTg小鼠的大体表现在20周龄前，Tg小鼠与同窝对照（WT）小鼠表型无明显差别。20周龄以后，Tg小鼠逐渐出现病态表现：明显消瘦，颈椎前突，

8、弓背畸形，体毛皱褶，摄食减少，活动能力差，生存时间缩短，体重减轻明显；脾大，脏器与体重比增大，尤其以雌性小鼠更为常见。3、AKautoAbTg小鼠相关