复方树莓提取液中sod活性测定与其体内影响的实验-研究

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1、引言树莓(Raspberry)，义称覆篙子，俗称野草莓，为多年生落叶小灌小类其果实为聚合浆果[1]。近年来，树莓的种植在国内逐步兴起，各地均有一定种植面积，但是对其的研究主要集中在食品或饮料加工方面[25]。树莓浆果柔嫩多汁，含有包括各种氨基酸、维生素等多种营养物质及还有鞣化酸、SOD、黄酮、花青素等具有特定生物学功效的营养成分[6]。树莓的这些营养成分不仅赋予树莓独特的风味，也与其对食用者健康的保护作用密切相关。研究表明，树莓果汁具有抑制癌细胞、延缓衰老等功效[7，8]。其作为功能食品具有极大的

2、丌发应用价值。既往研究表明，生物体内氧自由基生成增多是组织各种损伤发生的主要机制之一。正常情况下，生物体内存在的氧自由基主要是活性氧反应产物。许多物理、化学、生物因素都可诱发产生大量的自由基，自由基以各种方式造成组织急性或慢性损伤[9]。所以，了解自由基的平衡状态，对于预防疾病，治疗疾病都有非常重。由于自由基的高度化学活泼性，它极易与相邻的物质发生电子的得、失交换，而且病理情况下自由基生成的数量大大增加，超出了机体的调控、保护能力，继而攻击核酸、蛋白质、脂质等生物大分子，造成组织细胞的损伤。超氧化

3、物歧化酶(SuperoxidedisnlLll．．ase，SOD)是生物体内一种重要的含金属抗氧化酶，分布于全身各组织中，它们的功能都是与超氧阴离子反应形成过氧化氢，再由过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶转变成水，从而使自由基清除，保护细胞免受损害。由于超氧阴离子常是活性氧生成过程中的初始产物，因此，SOD也被看作为活性氧防御的第一线，其活性的高低反映了机体抗氧化能力的强弱。临床标本验证结果表明，消化系统疾病、肾脏疾病、呼吸系统疾病、烧伤整形、脑血管疾病、心血管疾病患者的血清SOD活性水平低于健康对照

4、绢。血清SOD是氧自由基清除酶，反应机体内自由基总量，自由基应激状况是否失衡，与自由基代谢状态呈负相关[11]。MDA是脂质过氧化反应的代谢产物，其含量的高低问接反映了绀纱5中氧A由基含帚的变化，以及细胞受自由基攻击后脂质过氧化的程』蔓。本研究首先分析了复方树莓提取液中SOD的活力，继而通过动物实验，进一步验证J7咳复力”树莓提取液灌胃后，对小鼠体内SOD含量的影响，为域人限度丌发利刚树莓的药剧保健价值提供实验依据。青岛火：学硕I．学位论文第一部分复方树莓提取液中SOD活力测定SOD又称超氧化物歧

5、化酶(SuperoxideDismutase)，是重要的氧自由基清除剂。山于人体衰老及许多疾病与机体内过量氧自由基，尤其是超氧阴离子有关，因此积极地补充SOD有助于减少或阻断脂质过氧化反应，延缓机体衰老。已经证实SOD口服有效，SOD作为食品添加剂，主要应用在两个方面：一是可作为罐头、果汁等的抗氧剂以及水果、蔬菜的保鲜剂；二是作为食品营养强化剂。SOD作为纯天然添加剂已在国内外得到广泛应用。1．1测定原理通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用

6、下呈现紫红色，用可见分光光度计测其吸光度。当被测样品中含SOD时，SOD对超氧阴离子自由基有专一的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的SOD活力。1．2主要仪器与试剂1．2．1主要仪器UV一3000紫外分光光度计：上海美谱达仪器有限公司。DF～101S集热式恒温加热磁力搅拌器：郑州长城科工贸有限公司。DG一800旋涡混合器：北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司。1．2．2主要试剂SOD试剂盒：南京建成生物工程研究所。分析纯级冰乙酸：

7、南京化学试剂有限公司。1．3方法与步骤1．3．1试齐J盒的配!占。．试剂一：贮嵛液：5川1×】瓶(天冷或放冰箱会有部分结晶析出，需热水浴溶解后冉用)。试剂』茈川液的7呢制：川1时每瓶5『¨1妒备液加双蒸水稀释至51)m1，4℃第一部分复方树莓提取液中S01)活力测定保存1年。试剂二：液体5ml×1瓶，4、10℃保存1年。试剂三：液体5ml×1瓶，4’10℃保存1年。试剂四：贮备液，350“×1支，4℃保存，不可冷冻；4号稀释液，5m1×1瓶，4℃保存6个月。试剂四应用液的配制：用时按贮备液：稀释液

8、=1：14比例配制，用多少配多少。4℃保存，不可冷冻。试剂五：粉剂×1支，用时加70’80℃热双蒸水37．5ml溶解后备用，若加热过程中水分蒸发减少，此时必须用双蒸水补充至37．5ml，配好后的试剂避光4℃冷藏1年。试剂六：粉剂X1支，用时加双蒸水37．5ml溶解后备用，配好后的试剂避光4℃冷藏保存6个月。显色剂的配制：按试剂五：试剂六：冰乙酸=3：3：2的体积比配显色剂，用多少配多少，配好的显色剂4℃避光冷藏3个月。1．3．2最佳取样量的确定定义百分抑制率在45％、50％左右的取