实验二十七对羟基苯甲酸酯类混合物的反相hplc分析

《实验二十七对羟基苯甲酸酯类混合物的反相hplc分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、实验二十七对径基苯甲酸酯类混合物的反相HPLC分析一、实验目的1.学习HPLC保留值定性方法和归一化法定量方法。2.熟悉HPLC分析操作。二、实验原理在对耗基苯甲酸酯类混合物中含有对拜基苯甲酸甲酯、对拜基苯甲酸乙酯、对轻基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯，它们均为强极性化合物,可以采用反相HPLC进行分析,选用非极性的C-18烷基键合相为固定相，甲醇水溶液为流动相。由于在一定的实验条件下，酯类各组分的保留值保持恒定，因此在相同的实验条件下，将测得各未知物的各组分保留时间，与已知纯酯类各组分的保留时间进行比较对照，即可确定未知物中各组分是否存在。

2、这种利用纯物质对照进行定性分析的方法，适用于來源已知、组分简单的混合物定性分析。本实验进一步采用归一化法定量，归一化法的使用条件以及计算公式均与气相色谱分析法相同：ci?fiAi?fAii?ln?100%i对径基苯甲酸酯类混合物属同系物，具有相同的牛色团和助色团，因此在紫外光度检测器上它们具有相同的定量校正因子，故上式可进一步简化为:ci?Ai?Ai?ln?100%i三、仪器与试剂1.仪器：LC-7000高效液相色谱仪；紫外检测器；ODS色谱柱(4.6mmX150mm)；微量注射器(平头)；超声波脱气机；抽滤装置一套。2•试剂：甲醇(色谱纯

3、)；对羟基苯甲酸甲酯；对羟基苯甲酸乙酯;对瓮基苯甲酸丙酯；对轻基苯甲酸丁酯。以上试剂均为分析纯。纯水：去离子水,再经一次蒸憾。3•标准储备液配制:分别于4只100mL容量瓶中，配制浓度均为1000Ug/mL的上述4种酯类化合物的甲醇溶液。摇匀备用。4.标准使用液配制：分别用上述4种标准储备溶液于4只10mL容量瓶中配制浓度均为10Ug/mL的甲醇溶液。摇匀备用。5•标准混合使用液配制：于一只10mL容易瓶中，用上述4种标准储备溶液，配制含上述4种酯类均为10ug/mL的混和甲醇溶液。摇匀备用。四、色谱条件ODS色谱柱(4.6mmX150mm

4、)；流动相：甲醇：水二55：45,流量：1.0mL/min；紫外光度检测器：波长254nm,灵敏度0.04；进样量：3PL。五、实验步骤1.将配制好的甲醇水溶液置于超声波发生器上脱气15mine2.根据实验条件，按仪器使用说明调节仪器至进样状态，待仪器液路及电路系统达平衡，即基线呈现平直时，即可进样。依次吸取3PL的4种标准使用液、标准混合使用液及未知试液进样，记录各色谱图，重复2次实验。六、数据处理1.记录实验条件（含色谱柱及固定相、流动相及其流速、检测器及英进样量等）。2.测量所得色谱图中4种对羟基苯甲酸酯化合物的tR,并填入表10o表

5、10对轻基苯甲酸酯类化合物的t表标准混合液色谱图上各色谱峰的保留时间t3.依次测量标准混合液色谱图上各色谱峰的保留时间tR值，将其填入表11,与表10对照以确定各色谱峰代表的是何物质，并将结果填入表llo4.测定未知样品色谱图上各组分的色谱峰峰高h、峰底宽W,计算各组分峰面积Ai及其含量ci,并将数据列入表12中。表12未知样品色谱图上各组分的峰高h、峰底宽W、峰面积A及其含量c七、附注色谱柱的个体差异很大，即使是同一厂家的同型号色谱柱，性能也会有差异。因此，色谱条件（主要是流动相配比）可根据实际情况作适当的调整。八、思考题1.HPLC采用

6、归一化法定量有什么优点？本实验为什么可以不用相对质量校止因子？2.在HPLC中，利用保留值定性的依据是什么？你认为这种定性方法可靠吗？3•本实验采用的是哪一种液■液分配色谱法？为什么采用？4.在HPLC中流动相为何要脱气？否则会对实验产生什么影响吗？